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实时荧光定量PCR检测鳜IgM mRNA标准品质粒的构建

文献类型: 中文期刊

作者: 刘雨果 1 ; 潘厚军 2 ; 陈偿 3 ; 巩华 2 ; 石存斌 2 ; 吴淑勤 2 ;

作者机构: 1.广东海洋大学水产学院

2.中国水产科学研究院珠江水产研究所

3.中国科学院南海海洋研究所

关键词: 鳜;IgM基因;实时荧光定量PCR

期刊名称: 广东海洋大学学报

ISSN: 1673-9159

年卷期: 2008 年 28 卷 06 期

页码: 1-4

摘要: 利用SYBR Green I荧光定量PCR技术,建立鳜IgM-DNA定量标准品的制备方法。从浸泡免疫后的鳜头肾中提取总RNA逆转录合成cDNA,对目的片段进行PCR扩增、电泳纯化、T-A克隆及测序鉴定。将所得预期质粒梯度稀释后构建标准曲线并进行融解曲线分析。结果表明,当标准品的浓度在3.29×102~3.29×108拷贝/μL时,模板浓度与循环阈值(Ct)间的线性关系良好,相关系数r2达到0.999;融解曲线分析显示具特异的单个峰,表明扩增产物特异性非常好。此法制备的重组质粒标准品可用于对鳜IgM基因的转录水平进行测定。

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