文献类型： 中文期刊

作者： 赵忠润 ¹ ; 包慧芳 ² ; 王宁 ² ; 周亚飞 ¹ ; 杨慧 ¹ ; 王炜 ³ ;

作者机构： 1.石河子大学生命科学学院

2.新疆农业科学院微生物应用研究所

3.新疆农业科微生物应用研究所

关键词： serC基因;pEC7;基因克隆;原核表达

期刊名称： 新疆农业科学

ISSN： 1001-4330

年卷期： 2010 年 47 卷 12 期

页码： 2505-2509

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】检测磷酸丝氨酸转氨酶(serC)基因在大肠杆菌中能否高效表达。【方法】根据GenBank所公布的serC基因序列设计一对特异性引物,以E.coli JM109基因组为模板PCR扩增目的基因片段,将得到的目的基因定向克隆至大肠杆菌/黄色短杆菌穿梭表达载体pEC7中,构建重组表达载体并转化宿主菌E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE分析。【结果】通过PCR扩增得到约1100 bp的DNA片段,经测序后分析该基因与已发表的serC基因具有99.27%的同源性;对重组表达载体进行酶切和PCR方法鉴定正确的命名为pEC7-C;重组表达载体转化宿主菌,SDS-PAGE分析可见约41 kD与理论大小一致的目标蛋白条带。【结论】重组表达载体转化后E.coliBL21中蛋白表达量比原始菌株的蛋白表达量高,证明serC基因在E.coli BL21(DE3)中成功表达,为进一步构建L-丝氨酸高产基因工程菌奠定了基础。