文献类型： 中文期刊
作者： 韩猛立 1 ; 黄新 1 ; 何延华 1 ; 宋天增 1 ; 薄新文 1 ; 钟发刚 1 ;
作者机构： 1.新疆生产建设兵团绵羊繁育生物技术重点实验室
关键词： 牛;Toll样受体;外周血单核细胞;实时荧光定量RT-PCR;SYBR-GreenⅠ
期刊名称： 农业生物技术学报
ISSN： 1674-7968
年卷期： 2011 年 19 卷 03 期
页码： 135-143
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 建立检测牛Toll样受体(TLRs)mRNA表达水平的SYBR GreenΙ实时荧光定量PCR方法。根据GenBank中BoTLR-2、3、4、5、7、8和10的基因序列,在其保守区设计并合成各自特异性引物,以牛3-磷酸甘油脱氢酶基因(GAPDH)为内参,建立实时荧光定量PCR方法。结果表明,在1×102～1×109copies/μL范围内,BoTLRs和GAPDH基因的Ct值与阳性质粒的浓度均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.991。溶解曲线分析表明,产物为特异的单峰,具有较高的灵敏度和特异性。重复性结果表明,TLRs和GAPDH基因阳性质粒,最小检出浓度达到100和10copies/μL,组内、组间变异系数值均保持在3.5%以内。临床样品检测结果表明,TLR3和TLR8mRNA水平在诱导培养早期较高,在4h达到高峰,而TLR4和TLR7水平与之相反,在诱导培养后期较高,在24h达到高峰,表明本研究所建立的检测方法成功用于临床样品的检测,为在mRNA水平对BoTLRs的定量分析提供技术平台。
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