文献类型： 中文期刊

作者： 陈如敬 ¹ ; 吴学敏 ¹ ; 陈秋勇 ¹ ; 严山 ¹ ; 吴仁杰 ¹ ; 车勇良 ¹ ; 王隆柏 ¹ ; 周伦江 ¹ ;

作者机构： 1.福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽疫病防治工程中心

关键词： 猪圆环病毒4型（PCV4）;Rep蛋白;原核表达;多克隆抗体

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2023 年 010 期

页码： 4188-4195

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】应用原核表达系统表达猪圆环病毒4型（Porcine circovirus type 4,PCV4）复制酶蛋白（Rep）,纯化后免疫小鼠制备Rep蛋白多克隆抗体。【方法】以PCV4福建株（FJ2020001）为模板，采用PCR法扩增获得Rep基因片段，构建原核表达质粒pET-30a-Rep;将pET-30a-Rep转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，用0.5 mmol/L IPTG诱导表达重组Rep蛋白，利用SDS-PAGE和Western blotting鉴定重组蛋白。表达产物经镍柱纯化后免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体，利用Western blotting和间接ELISA鉴定鼠源多克隆抗体的免疫原性和抗体效价。【结果】成功克隆PCV4 Rep基因，构建了可表达重组Rep蛋白的原核表达质粒；SDS-PAGE结果显示，表达的重组蛋白分子质量约为35 ku,主要以包涵体形式存在；Western blotting结果表明，该蛋白能被PCV4阳性血清和鼠源多克隆抗体特异性识别，制备的鼠源多克隆抗体效价可达1∶16 000。【结论】本研究成功表达并纯化了具备抗原性的PCV4重组Rep蛋白，为开发PCV4血清学诊断试剂盒和开展猪场PCV4流行病学调查奠定基础。