文献类型： 中文期刊
作者： 陈鑫鑫 1 ; 王林建 1 ; 乔松林 1 ; 李睿 1 ; 邓瑞广 1 ; 张改平 1 ;
作者机构： 1.河南省农业科学院
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV);HN07-1;感染性克隆;反向遗传技术;病毒拯救
期刊名称： 农业生物技术学报
ISSN： 1674-7968
年卷期： 2021 年 29 卷 010 期
页码： 2043-2050
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 猪繁殖与呼吸综合征是世界规模化猪场的主要疫病之一,主要由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起.本研究旨在构建PRRSV高致病性毒株HN07-1反向操作系统.通过将基因组进行分段克隆和测序的方法获得HN07-1毒株全长基因组序列.运用反向遗传学技术将全基因组分段克隆至载体上,构建含有全长HN07-1毒株cDNA的感染性克隆pcDNA3.2-rHN07-1,并以此为骨架,构建在PRRSV基因组ORF1b和ORF2a间插入增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的重组克隆pcDNA3.2-rHN07-1-EGFP;将构建的质粒转染Marc-145细胞拯救病毒.采用免疫荧光实验(immune fluorescence assay,IFA)和Western blot进行表达鉴定并对重组病毒进行滴度测定与分析.结果表明,PRRSV毒株HN07-1基因组全长15345 nt,转染Marc-145细胞盲传一代后培养48 h出现典型的细胞病变效应,IFA和Western blot检测结果表明,拯救病毒与亲本毒株HN07-1一致,都能检测到PRRSV N蛋白表达.并且拯救病毒与亲本毒株具有相似的生长动力特性.综上所述,本研究成功构建了HN07-1感染性克隆,可用于反向遗传操作,为PRRSV致病机制研究及疫苗研发提供了参考.
- 相关文献
作者其他论文 更多>>
-
猪细小病毒4型单克隆抗体制备及抗原表位鉴定
作者：柴书军;杨苏珍;刘运超;冯华;魏蔷;王方雨;金前跃;张改平
关键词：猪细小病毒4型;单克隆抗体;抗原表位
-
猪繁殖与呼吸综合征病毒入侵宿主细胞途径研究进展
作者：李睿;乔松林;张改平
关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）;入侵;内吞;巨胞饮;膜融合
-
鸡减蛋综合征病毒中和性单克隆抗体的制备、鉴定及在双抗体夹心ELISA中的应用
作者：魏蔷;李青梅;金前跃;宋亚鹏;白怡霖;张改平
关键词：减蛋综合征病毒;纤维蛋白;中和性单克隆抗体;抗体中和效价;双抗体夹心ELISA
-
减蛋综合征病毒抗体胶体金免疫层析试纸条的研制及初步应用
作者：宋亚鹏;孙亚宁;刘琳;杨继飞;李新生;魏蔷;张改平
关键词：减蛋综合征病毒;Fiber蛋白;免疫层析试纸;血凝抑制试验
-
基于量子点技术的猪伪狂犬病病毒gB抗体免疫层析试纸研究
作者：杨苏珍;刘运超;邢云瑞;孙亚宁;尚延丽;张改平
关键词：猪;伪狂犬病病毒（PRV）;量子点;抗体;试纸
-
狂犬病毒GSQY-Dog-China-2013株全基因组序列测定和遗传进化分析
作者：邢广旭;姜中毅;焦文强;王方雨;张改平
关键词：狂犬病病毒;GSQY-Dog-China-2013;全基因组序列测定;遗传进化分析
-
树突状细胞(DCs)交叉递呈疫苗抗原分子途径研究进展
作者：杨苏珍;刘运超;尚延丽;张改平
关键词：树突状细胞;抗原交叉递呈;MHCⅠ;猪;免疫应答
