文献类型： 中文期刊
作者： 王方昆 1 ; 王一成 2 ; 袁秀芳 2 ; 徐丽华 2 ;
作者机构： 1.山东农业大学动物科技学院
2.浙江省农业科学院畜牧兽医研究所
关键词： 猪胸膜肺炎放线杆菌;ApxⅣ;克隆;表达
期刊名称： 中国兽医学报
ISSN： 1005-4545
年卷期： 2007 年 27 卷 05 期
页码： 657-660
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 以猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清2型标准菌株基因组DNA为模板,用PCR方法扩增ApxⅣ毒素基因特异片段1.5 kb左右,将PCR产物纯化后与pMD18-T连接并测序,结果该片段的碱基序列与GenBank中标准株序列的同源性为98%。随后将该片段亚克隆到原核表达载体pET-28a(+)的多克隆位点,经鉴定后得到重组质粒pET-ApxⅣ,将此重组质粒转化到受体菌BL21-DL3中,并用诱导剂乳糖进行诱导表达,5 h后表达达到高峰。经12%SDS-PAGE电泳检测,表达得到的融合蛋白约为61 000。经Western blotting分析,表达蛋白能与APP阳性血清发生特异性反应,而与阴性血清不反应。
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