文献类型： 中文期刊

作者： 朱佳慧 ¹ ; 徐秋芳 ¹ ; 袁平平 ¹ ; 倪海平 ¹ ; 周益军 ¹ ; 蒋选利 ¹ ; 杜何为 ¹ ;

作者机构： 1.长江大学生命科学学院;江苏省农业科学院植物保护研究所;贵州大学农学院

关键词： 水稻;幼苗cDNA文库;酵母双杂交;水稻黑条矮缩病毒;滴度;库容;重组率

期刊名称： 江苏农业科学

ISSN： 1002-1302

年卷期： 2018 年 09 期

页码： 47-50

收录情况： 北大核心

摘要： 为解析水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)与寄主水稻的互作机制,筛选水稻中与病毒互作的蛋白,以易感RBSDV的水稻品种日本晴3~4叶期的组织样品为材料,通过提取总RNA后分离获得m RNA,合成cDNA双链后连入pDONR222载体,获得初级文库。初级文库的滴度为6.6×10~6CFU/mL,库容为1.9×10~7CFU,重组率>95%,插入片段平均长度>1 kb。提取初级文库质粒,通过重组反应将水稻cDNA文库转移至pGADT7-DEST载体,构建获得水稻幼苗的酵母双杂交cDNA文库,文库的滴度为4.5×10~6CFU/mL,库容为1.3×10~7CFU,重组率>95%,cDNA插入片段平均长度>1 kb。采用RBSDV候选基因进行文库筛选,结果表明所构建的酵母文库可用于筛选病毒互作蛋白。