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基于TaqMan探针的猪圆环病毒1型荧光定量PCR检测方法的建立

文献类型： 会议论文

第一作者： 张福良

作者： 张福良 1 ; 安阳工学院 2 ; 孙丽华 1 ; 宋长绪 1 ; 杨鸣琦 3 ; 朱道中 4 ; 宋志军 1 ;

作者机构： 1.广东省农科院兽医研究所,广东,广州,510640

2.河南,安阳,455000

3.西北农林科技大学,陕西,杨凌,712100

4.广州出入境检验检疫局,广东,广州,510623

关键词： 猪疾病;圆环病毒;PCV1;ORF2;基因克隆;重组质粒;荧光定量检测;TaqMan探针

会议名称： 中国畜牧兽医学会养猪分会2006年学术年会暨第四次全国会员代表大会

主办单位： 中国畜牧兽医学会

页码： 358-364

摘要： 通过PCR方法克隆了PCV1 ORF2基因,构建重组质粒pMD-ORF2作为标准阳性模板.同时根据GenBank中的PCV1 ORF2基因序列设计了用于FQ-PCR的一对引物和一条TaqMan探针.通过条件优化,以定量的10倍系列稀释的质粒pMD-ORF2为标准品进行荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立了PCV1检测的荧光定量PCR方法.结果表明，该方法检测灵敏度可达1.0×101拷贝/μL,线性范围为1010～101,达10个数量级;对起始浓度为1.0×107、1.0×106、1.0×105拷贝/μL的标准品的最终实际测得值分别为1.001×107、0.869×106和0.988×105拷贝/μL,变异系数分别为4.758％、1.865％和3.836％,说明此方法具有良好的准确性和重现性.对阳性组织病料的检测表明，该方法的检测灵敏度高出常规PCR,与套式PCR(nPCR)具有相近的灵敏度.

分类号： S852.659.2`S858.28

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