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TaqMan荧光定量RT-PCR检测猪繁殖与呼吸综合征病毒方法的建立

文献类型： 会议论文

第一作者： 宋志军

作者： 宋志军 1 ; 广东省农科院兽医研究所 2 ; 宋长绪 3 ; 杨增岐 1 ; 朱道中 4 ; 武占银 5 ; 蒋智勇 3 ; 林志雄 4 ; 刘燕玲 3 ; 张福良 1 ;

作者机构： 1.西北农林科技大学动物科技学院,陕西,杨凌,712100

2.广东,广州,510640

3.广东省农科院兽医研究所,广东,广州,510640

4.广州出入境检验检疫局,广东,广州,510623

5.宁夏动物防疫站,宁夏,银川,750002

关键词： 猪繁殖;病毒病;呼吸综合症;荧光探针;病毒检测;荧光定量检测

会议名称： 中国畜牧兽医学会养猪分会2006年学术年会暨第四次全国会员代表大会

主办单位： 中国畜牧兽医学会

页码： 417-421

摘要： PRRSV的快速检测方法虽然很多,但实际生产和科研需要对其进行快速定量检测.本研究建立了PRRSV的TaqMan荧光定量RT-PCR技术.首先根据GenBank上登陆的PRRSV保守基因序列设计合成引物和探针,并进行筛选。然后对荧光定量PCR反应条件进行优化并获得标准曲线,同时用该方法对送检组织病料进行检测,并与常规RT-PCR进行对比.结果表明,所建立的荧光定量RT-PCR检测灵敏度可达5.0×100拷贝/μL,比常规RT-PCR灵敏度高100倍。用该方法对东莞、湛江、增城等地的猪血清、多种组织样品进行荧光定量PCR检测,结果该方法与常规RT-PCR阳性符合率为100％。用该方法对三份不同的组织样品进行重复检测,计算得到平均循环阈值的标准差分别为0.14、0.14和0.44,变异系数分别为0.01％、0.01％和0.02％,说明该方法具有良好的重复性,可满足当前PRRS的诊断需求。应用说明，该方法可对模板进行准确定量,可用于该病致病机理,疫苗研制等方面的研究.

分类号： S828`S857.22`S855.3

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