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猪Ⅱ型圆环病毒ORF1、ORF2基因串联重组腺病毒的构建

文献类型: 会议论文

第一作者: 祝卫国

作者: 祝卫国 1 ; 西北农林科技大学动物科技学院 2 ; 宋长绪 1 ; 王贵平 1 ; 杨增歧 3 ; 王旭荣 3 ; 黄忠 1 ; 张春红 1 ;

作者机构: 1.广东省农业科学院兽医研究所,广州,广东,510640

2.杨凌,陕西,712100

3.西北农林科技大学动物科技学院,杨凌,陕西,712100

关键词: 猪Ⅱ型圆环病毒;ORF1基因;ORF2基因;重组腺病毒;PCR

会议名称: 中国畜牧兽医学会第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会

主办单位: 中国畜牧兽医学会

页码: 446-449

摘要: 利用PCR分别扩增猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)ORF1基因和ORF2基因,按正确的读码框以串联的方式依次克隆入pMD18-T载体.经过酶切鉴定和测序证实无误后,酶切目的基因亚克隆入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV.构建成功的重组穿梭质粒经酶切和测序鉴定,含有完整的目的基因表达盒,穿梭质粒用PmeI线性化后可与腺病毒骨架载体pAdeasy-1在细菌(BJ5183)内进行同源重组,以产生重组腺病毒质粒.将PCR与PacI酶切鉴定的重组腺病毒质粒用PacI线性化后转染293细胞,在293细胞内包装成为完整的腺病毒,通过荧光显微镜观察、PCR检测可以确定ORF1基因和ORF2基因串连重组腺病毒构建成功。

分类号: S852.651`S854.43

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