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E.coli LTb与PRRSV gp5融合基因原核表达及小鼠免疫效果研究

文献类型： 会议论文

第一作者：

作者： 袁秀芳 1 ;

作者机构： 1.袁秀芳@浙江省农业科学院畜牧兽医研究所,浙江杭州 310021--刘焕@浙江省农业科学院畜牧兽医研究所,浙江杭州 310021--王一成@浙江省农业科学院畜牧兽医研究所,浙江杭州 310021--徐丽华@浙江省农业科学院畜牧兽医研究所,浙江杭州 310021--张存@浙江省农业科学院畜牧兽医研究所,浙江杭州 310021--

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒;gp5融合基因;原核表达;免疫效果;PCR重叠延伸技术

会议名称： 中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会

主办单位： 中国畜牧兽医学会

页码： 406-412

摘要： 采用PCR重叠延伸技术将LTb和PRRSV ORF5基因通过柔性连接进行融合后,克隆入原核表达载体pET-28a(+)的多克隆位点中,经鉴定后得到重组质粒pET-LTb-gp5,将重组质粒转化到受体菌BL21(DE3)中,并用诱导剂IPTG进行诱导表达,经15%SDS-PAGE电泳检测,表达得到的蛋白大小为26KD。经WesternBlotting分析,表达蛋白均能与PRRSV阳性猪血清发生特异性反应,而与阴性血清不反应。为了比较猪繁殖与呼吸综合症ORF5基因的原核表达蛋白gp5蛋白及融合表达的LTb-gp5蛋白的免疫效果。将表达产物gp5蛋白及融合表达的LTb-gp5蛋白免疫6-8周龄ICR小鼠,并设对照组,用间接ELISA法和MTT法检测小鼠血清中特异性抗体水平以及脾脏中T,B淋巴细胞增殖功能。结果gp5蛋白以肌肉注射途径免疫效果较好;三免后抗体达到较高水平,其中LTb-gp5 IM与gp5乳化组之间差异不显著,而这两组与gp5 IM差异显著;LTb-gp5IM、gp5乳化组和gp5IM均能够诱导脾脏T,B淋巴细胞增殖。

分类号： S858.28:S855.3`S852.4

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