文献类型： 会议论文
第一作者： Zhang Lili
作者： Zhang Lili 1 ; 张莉莉 2 ; Ye Xing 3 ; 叶星 1 ; Jiang Xiaoyan 2 ; 江小燕 4 ;
作者机构： 1.Pearl River Fisheries Research Institute,Chinese Academy of Fishery Sciences
2.Guangzhou 510380,PR China
3.中国水产科学研究院珠江水产研究所,510380,广州,中国
4.中国水产科学研究院珠江水产研
关键词： 金鱼;角蛋白;基因启动子;表皮细胞;克隆技术
会议名称： 第六次全国动物生物技术学术研讨会
主办单位： 中国农业生物技术学会
页码： 1-1
摘要： 角蛋白是构成细胞骨架中间丝的主要家族之一,主要分布于高等真核生物的表皮细胞。本文用RT-PCR和RACE方法扩增出金鱼角蛋白基因全长cDNA,所分离的基因经blast比对鉴定为keratin8.用荧光定量PCR方法检测显示,keratin8基因在所检测的各组织中均有表达。其中皮肤、鳍条和鳃中的表达量最高。根据keratin8 cDNA5’端侧翼序列设计引物,用Genome walker方法分离出此基因的启动子区域1855bp,用TESS在线软件预测出启动子的TATA框及其它转录元件。构建了四个含有不同长度启动子的荧光素酶表达载体，并将其分别和参照质粒pRL-TK共转染于鲤鱼上皮瘤细胞(EPC)中，结果显示含有启动子-1—-864区域的PGL3-KF3表达载体的转录活性最高。为进一步证明此区域在体内的转录活性，构建含有-1—-864启动子区域的绿色荧光蛋白表达载体pgfT2AL220R185-KF3，通过To12转座酶系统把此质粒注射入斑马鱼受精卵，结果显示在皮肤包括眼、心脏、唇、鳃盖中的上表皮均有绿色荧光蛋白的表达，本研究为下一步在转基因鱼上的应用奠定基础。
分类号： S965.8
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