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检测罗非鱼血清中抗罗湖病毒IgM特异性抗体间接ELISA方法的建立及应用

文献类型： 会议论文

第一作者： 曾伟伟

作者： 曾伟伟 1 ; 胡虎子 1 ; 王英英 1 ; 王庆 1 ; 尹纪元 2 ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院珠江水产研究所,农业部渔药创制重点实验室,广东省水生动物免疫重点实验室,广东广州510380

2.中国水产科学研究院珠江水产研究所,农业部渔药创制重点

关键词： 养殖罗非鱼;罗湖病毒;IgM特异性抗体;间接EILSA检测

会议名称： 广东水产学会第二届青年科技论坛

主办单位： 广东水产学会

页码： 00000134-00000142

摘要： 前期研究表明罗非鱼湖病毒(Tilapia lake virus,TiLV)基因节段8(S8)编码蛋白是一种具有高免疫原性的结构蛋白,大小约为20kD,暂命名为VP20.目前,由于缺乏TiLV免疫原性抗原和易获取的抗罗非鱼IgM单克隆抗体(mAb),至今还没有TiLV的血清学诊断方法.本研究以大肠杆菌表达系统中表达的VP20重组蛋白为包被抗原,以新研制的罗非鱼IgM单克隆抗体(mAbs)作为二抗,采用棋盘滴定法优化抗原包被浓度和血清稀释度,建立了检测罗非鱼血清中抗TiLV特异性IgM抗体水平的间接ELISA(iELISA)方法.通过检测倍比稀释的TiLV阳性血清和罗非鱼其它病原阳性血清来评价iELISA的分析敏感性和特异性,通过与间接免疫荧光法(IFA)及巢式PCR(nested PCR)检测比较人工感染罗非鱼的血清中特异性抗体和肾脏组织中病毒感染情况,评价iELISA诊断敏感性和特异性.结果表明,本研究建立的iELISA方法具有较高的分析敏感性和特异性,与IFA方法相比,其诊断灵敏度和特异性分别为100％和92.6％,与巢式PCR相比,其诊断灵敏度和特异性分别为81.8％和95.6％.使用iELISA对TiLV状态未知的野外罗非鱼血清样本进了血清学调查表明,73份血清经iELISA检测出13份血清呈阳性反应,即TiLV抗体阳性率为17.8％.综上所述,新开发的iELISA是一种非常特异的和敏感的检测方法,对于养殖场中罗非鱼TiLV感染情况的血清学调查及疫苗免疫后的抗体水平监测具有重要意义.

分类号： S965.125

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[1]冷藏罗非鱼优势腐败菌的鉴定及其特征. 郭全友,杨宪,时许. 2009

[2]冷藏罗非鱼特定腐败菌的鉴定和生长动力学. 郭全友,许钟,杨宪时. 2009

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