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猪繁殖与呼吸综合征病毒RT-PCR检测方法的建立和优化

文献类型： 会议论文

第一作者： 孙颖

作者： 孙颖 1 ; 梁婉 1 ; 刘欢欢 1 ; 武文清 1 ; 华琳 1 ; 彭忠 2 ;

作者机构： 1.湖北省农业科学院畜牧兽医研究所,农业部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室,武汉430070

2.湖北省农业科学院畜牧兽医研究所,农业部畜禽细菌病防

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒;RT-PCR法;检测引物

会议名称： “猪高效安全养殖”项目群成果交流会暨第十九届全国规模化猪场主要疫病监控与净化专题研讨会

主办单位： 华中农业大学`生猪健康养殖协同创新中心`农业微生物学国家重点实验室

页码： 00000072-00000085

摘要： 为了解决现有的RT-PCR法诊断猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive And Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)中存在的步骤繁琐、耗时长、RNA容易降解等问题,本研究针对现有的PRRSV检测方法进行优化,主要包括PCR扩增方法及检测引物的优化与筛选;并参照GenBank中PRRSV毒株CH-1a和NADC30的全基因组序列设计针对ORF5全长和筛选了一对Nsp2部分片段的检测引物,对优化后的PCR检测方法进行了验证.研究结果显示:相对于"一步法"而言,"两步法"PCR扩增病毒核酸的优化方法能够显著提高检测的特异性和准确性,降低假阳性的产生;并将PCR产物Nsp2(Nsp2-3-F/Nsp2-3-R)/ORF5(ORF5-2-F/ORF5-2-R)基因序列分析,测序结果同源性以及遗传进化树结果与Nsp2/ORF5引物PCR结果一致.此外,本研究还分别报道了一对针对PRRSVORF5和一对针对Nsp2的引物,其中针对ORF5的检测引物进行优化,优化后的引物能显著提升ORF5的检出率,针对Nsp2的引物进行筛选,筛选引物能够利用一对引物同时鉴定PRRSV经典毒株、高致病性毒株和NADC30-like毒株.特异性试验还表明优化后的反应体系对HCV、H1N1、PRV、PPV的检测结果为阴性.该方法可直接对临床可疑组织样品进行快速检测,操作简单、价廉、受环境因素污染概率小.

分类号： S858.28:S852.65

  • 相关文献

[1]猪长链非编码RNA lnc-000649在PRRSV感染增殖中的作用. 吴俊静,乔木,周佳伟,梅书棋,彭先文. 2021

[2]猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株GP5基因的遗传变异与系统进化分析. 梁望旺,杨克礼,伍锐,熊忠良,刘泽文,段正赢,徐涤平. 2009

[3]猪繁殖与呼吸综合征病毒HBKM2株ORF5基因的克隆与原核表达. 梁望旺. 2009

[4]猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)协同感染细菌性疾病的分析研究. 李明波,库旭钢,赵海忠,宋忠旭,孙华,梅书棋. 2018

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