科研产出
半番鸭胚中鹅细小病毒的分离鉴定及其基因组分子特征分析
《畜牧兽医学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：通过胶体金试验、电镜观察及PCR扩增等方法,自半番鸭胚及孵化的雏半番鸭中分离获得了鹅细小病毒(GPV)毒株(命名为MDE株),并进行了病毒全基因组分子特征分析。结果表明,该病毒粒子为直径20~24nm的球形、无囊膜粒子。胶体金试验结果呈GPV阳性。该毒株基因组全长为5 106bp,与GenBank登录的15株GPV基因组序列相似性为93.2%~98.1%,其中与SH株及疫苗株SYG61v株等的相似性较高,而与半番鸭源的GPV重组病毒M15株相似性最低。基于病毒VP1和NS1基因的遗传进化分析表明,分离毒株MDE与GPV疫苗毒株的亲缘关系最近,处于同一个独立的分支上,与番鸭细小病毒的亲缘关系较远。与疫苗毒株SYG61v株比较,MDE株VP1区的糖基化位点增加了703NRTS糖基化位点。以上结果表明,本研究揭示了GPV可通过半番鸭胚垂直传播给雏鸭,丰富了GPV的生态学内容。
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检测水禽源细小病毒的胶体金试纸条的研制
《中国预防兽医学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：为建立水禽源细小病毒的快速检测方法,本研究采用纯化的小鹅瘟病毒(GPV)免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,筛选到21株能够稳定分泌抗GPV的单克隆抗体(MAb),将1株MAb纯化后与胶体金结合,喷涂金标垫,与另一株纯化的MAb配对,制成检测水禽源细小病毒的胶体金试纸条。特异性试验表明,鹅细小病毒、番鸭细小病毒和新型番鸭细小病毒的检测结果均为阳性,猪细小病毒、1型鸭甲肝病毒、坦布苏病毒、产蛋下降综合征病毒、H9N2亚型禽流感病毒、番鸭呼肠孤病毒和新城疫病毒等的检测结果均为阴性。该方法对鹅细小病毒、番鸭细小病毒和新型番鸭细小病毒的最低检出量分别为10~(4.7) ELD50/mL、10~(4.7)ELD50/mL和10~(5.7) ELD50/mL。重复性试验良好。对临床粪便样品的检测,该方法比PCR方法简单快速,但是存在漏检的情况。上述结果表明,本实验建立的方法可用于水禽源细小病毒病的初步快速筛查。
关键词： 鹅细小病毒 番鸭细小病毒 新型番鸭细小病毒 胶体金试纸条 单克隆抗体
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多壁碳纳米管固相萃取气相色谱-串联质谱法测定乌龙茶及土壤中10种三嗪类除草剂残留
《农药学学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：建立了乌龙茶及土壤中10种三嗪类除草剂(西玛津、莠去津、扑灭津、特丁津、敌草净、环丙津、西草净、莠灭净、扑草净和特丁净)残留的气相色谱-串联质谱(GC-MS/MS)分析方法。样品经乙腈提取后,以多壁碳纳米管(MWCNTs)、N-丙基乙二胺(PSA)、C18、Mg SO4为净化剂分散净化后,在GC-MS/MS多反应监测(MRM)模式下进行测定,空白基质匹配标准曲线外标法定量。研究了不同提取溶剂、不同吸附剂种类及用量对提取净化效率的影响。结果表明:在各自质量浓度范围内(西草净和扑草净在10~500μg/kg,其余8种除草剂在5~500μg/kg)具有良好线性关系,相关系数(r)均大于0.99,10种三嗪类除草剂的定量限(LOQ)为5.0~10μg/kg。在5~100μg/kg添加水平下,10种三嗪类除草剂在乌龙茶和土壤中的平均回收率在75%~111%之间,相对标准偏差(RSD)在3.1%~8.7%(n=6)之间。该方法操作简单、净化效果好、灵敏度高,具有良好的适用性,能够满足乌龙茶及土壤中10种三嗪类除草剂残留分析测定的要求。
关键词： 多壁碳纳米管 气相色谱-串联质谱 乌龙茶 土壤 三嗪类除草剂 残留
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丝瓜种质资源遗传多样性分析
《分子植物育种 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：本研究应用ISSR分子标记技术对所收集的30份丝瓜资源进行亲缘关系分析。从99对引物中筛选出16对引物进行条带扩增,共扩增出166条条带,其中多态性带有144条,多态性比例为86.75%。30份丝瓜资源的遗传相似系数0.313~0.951之间,春研三号丝瓜和纯英早青肉丝瓜材料亲缘关系最近,遗传相似系数为0.951,而泉州延陵丝瓜与六叶香棱丝瓜材料间亲缘关系最远,为0.313。在基因相似系数DS=0.313阈值处被分为两大类:普通丝瓜和有棱丝瓜。这和田间调查的结果一致。
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光照诱导广叶绣球菌基因组甲基化分析
《食用菌学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：利用荧光标记甲基化敏感扩增多态性技术(fluorescence-labeled methylation-sensitive amplified polymorphism,F-MSAP)比较广叶绣球菌(Sparassis latifolia)菌丝在光、暗条件下基因组胞嘧啶甲基化的变化。F-MSAP分析显示,15对选择性扩增引物共扩增出6383个CCGG位点,平均每个处理每对引物扩增47个条带,其中2849条片段发生甲基化。黑暗组、光照24h和光照48h处理组总甲基化水平分别是49.54%、41.71%和42.88%,黑暗组和光照处理组的总甲基化水平差异显著(P<0.01),而光照组间甲基化水平差异不显著(P=0.10)。与黑暗组相比,光照诱导全甲基化率升高,半甲基化率降低,差异显著(P<0.01)。总的趋势是光照引起广叶绣球菌菌丝DNA去甲基化。
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硝化抑制剂对典型茶园土壤尿素硝化过程的影响
《农业环境科学学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：通过室内好氧培养试验,研究了双氰胺(DCD)和2-氯-6-三氯甲基吡啶(Nitrapyrin)2种常用硝化抑制剂对我国4种典型茶园土壤硝化过程的影响。试验设置5个处理:(1)尿素(CK);(2)尿素+2%DCD(DCD占施氮量的2%,下同);(3)尿素+10%DCD;(4)尿素+0.27%Nitrapyrin;(5)尿素+0.54%Nitrapyrin。结果表明:对于4种供试茶园土壤,DCD在培养过程中对硝化过程的抑制效果随培养时间的延长呈下降趋势,且高浓度DCD仅在培养第28 d时才表现出比低浓度DCD更强的抑制效果。培养第28 d后,在安溪和宜兴茶园土壤中DCD的抑制率仍可达12.15%~59.68%,而对于杭州和郎溪茶园土壤,无论DCD浓度高低,培养第28 d后抑制效果消失;对于所研究的4种茶园土壤,DCD处理在培养期间的抑制效果表现为宜兴土壤>安溪土壤>杭州土壤>郎溪土壤。与DCD相比,无论Nitrapyrin浓度高低,其在培养期间对4种茶园土壤的硝化抑制率接近甚至超过100%,表明Nitrapyrin能完全抑制茶园土壤硝化作用,且抑制有效期达28 d。因此,Nitrapyrin是一种针对茶园土壤比较高效的硝化抑制剂。
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不同着生部位辣木叶营养成分差异分析
《南方农业学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：【目的】测定不同着生部位辣木叶的营养成分,掌握辣木叶营养成分含量变化规律,为辣木生产和加工提供参考。【方法】根据食品主要营养成分测定方法,测定分析辣木侧枝上不同着生部位叶片的蛋白质、脂肪、粗纤维、矿物质元素、维生素C和氨基酸含量。【结果】辣木叶含有人体所需的营养物质,其中,蛋白质含量在样品3(第六、七片叶)中的含量为38.82 g/100 g,与其他样品的差异极显著(P<0.01,下同);粗纤维含量在样品5(第十、十一片叶)中的含量为9.00g/100 g,与其他样品的差异极显著;脂肪在样品1(第二、三片叶)中的含量最低,为5.60 g/100 g,与样品2(第四、五片叶)和样品5的差异显著(P<0.05,下同);辣木叶中矿物质元素含量存在明显差异,其中钾和钙含量最丰富,含量为8400.00~24000.00μg/g,其他矿物质元素(镁、磷、锌、钠、锰、铁和铜)的含量为5.02~4000.00μg/g,随着叶位降低,镁、钠、锰、铁和铜含量呈先升高后降低的变化趋势,磷含量呈升高趋势,锌含量呈下降趋势;维生素C含量呈下降趋势,在样品1中含量最高;氨基酸总含量在样品3中含量最高(30.67 g/100 g),与其他样品的差异显著。【结论】不同着生部位对辣木叶各营养成分含量有一定影响。综合各营养成分含量差异,可采摘、利用不同部位叶片,开发成不同的辣木叶产品。
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种番鸭源巴泰病毒的分离及鉴定
《中国预防兽医学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：为确定引起种番鸭产蛋下降的病原,本研究应用透射电镜负染及理化特性测定等方法对1株分离自表现产蛋下降的283日龄种番鸭卵巢的病毒(ZJ1408株)进行研究,结合RT-PCR检测及序列分析结果,确定所分离病毒为布尼亚病毒属的巴泰病毒(BATV)。该病毒可在鸭胚成纤维细胞和Vero增殖并引起细胞病变。对病毒核蛋白部分序列测定与分析发现,该病毒与已发布的鸭源分离株ZJ14、牛源分离株XQ-B及NM/12核苷酸序列同源性在99.5%以上,与近年来报道的基因重配变异株Ngari的同源性为92%左右;遗传进化分析表明,该病毒株与早期蚊虫源BATV分离株MM2222、G-20217及804986等同处于亚-非基因型进化分支。以上结果表明我国饲养的鸭群存在BATV感染,这提示应充分重视该类人畜共患病病原在家禽中流行的监测。
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禽源多杀性巴氏杆菌重组外膜蛋白A间接ELISA方法的建立
《中国兽医学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：为建立基于重组外膜蛋白A的检测禽源多杀性巴氏杆菌抗体的间接ELISA方法,扩增去除信号肽的外膜蛋白A(outer membrane protein A,OmpA)基因,定向克隆到载体pET32a,构建重组表达质粒pET32a-PmOmpA,转化至Escherichia coli BL21(DE3)以IPTG进行诱导,通过镍离子亲和层析纯化重组蛋白,进行SDS-PAGE和Westernblotting分析。以重组蛋白为包被抗原建立间接ELISA方法,方阵滴定法确定其最佳包被浓度和血清的最佳稀释度。结果,重组蛋白能与阳性血清发生良好的免疫反应。重组蛋白的包被浓度为4mg/L,血清的最佳稀释度为1∶80。SPF鸡的新城疫、鸡白痢和大肠杆菌病阳性血清,隔离饲养的番鸭鸭瘟、鸭病毒性肝炎和鸭疫里默氏菌病阳性血清,用该方法检测均为阴性。板内变异系数和板间变异系数均小于10%。ELISA方法的敏感性比直接凝集试验高出80倍以上。以重组外膜蛋白A建立的ELISA方法具有良好的特异性、重复性和敏感性,可以用于禽霍乱感染性抗体的检测,也可用于禽霍乱灭活苗和荚膜疫苗免疫效果的检测。
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