紫色土区土壤质量敏感因子空间分异特征及其对土地利用方式变化的响应研究

杨小林; 花可可; 李义玲; 李太魁; 《生态环境学报 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：掌握土壤质量因子空间分异特征及其对土地利用方式变化的响应关系对于优化土地利用方式以及改善和提高土壤质量具有重要意义。通过对川中紫色土区典型小流域276样点土壤样品进行调查和分析,结合主成分分析(PCA)和典范对应分析(CCA)等方法,研究了川中紫色土区土壤质量主要敏感因子空间分异特征及其对土地利用方式变化的响应关系。结果显示,(1)紫色土区不同土地利用方式土壤总氮(STN)质量分数均值介于0.90-1.30g·kg~(-1);土壤总磷(STP)质量分数均值介于0.48-0.78 g·kg~(-1);土壤有机质(SOM)质量分数均值介于9.90-19.73 g·kg~(-1)。(2)主成分分析和典范对应分析表明,土壤质量敏感因子主成分与土地利用方式密切相关,且主成分与土地利用方式相关性排序表现为:第一主成分(铵态氮与物理性质),水田>水旱轮作田>旱地>林地>果园;第二主成分(STN和SOM),水田>水旱轮作田>林地>果园>旱地;第三主成分(STP和硝态氮),水旱轮作田>旱地>水田>林地>果园。(3)土壤质量主要敏感因子的变化能较好地响应土地利用方式变化,且土壤质量敏感因子与土地利用方式的CCA排序结果说明,不同的土地利用方式与土壤质量敏感因子间存在着不同的相关关系。土地利用方式的变化是紫色土区土壤质量敏感因子改变的重要驱动力,这将为区域土地资源合理利用、土地利用结构优化以及提高紫色土区土壤生产力和生态功能,特别是减轻区域水土流失状况提供依据。

关键词： 紫色土 土壤质量敏感因子 土地利用方式 响应关系

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狂犬病病毒G蛋白在水稻中的表达及遗传稳定性鉴定

申雪静; 张二芹; 许倩茹; 刘林科; 万博; 刘运超; 孙亚宁; 赵东; 牛香香; 邓瑞广; 张改平; 《农业生物技术学报 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：狂犬病病毒(Rabies virus, RV) G蛋白是唯一能激发机体产生细胞免疫,并诱导产生中和抗体的结构蛋白,也是狂犬病病毒中唯一糖基化的结构蛋白,此外还介导细胞融合、受体结合以及参与病毒的致病等。本研究将优化的狂犬病G基因(GenBank登录号:ABI53869.1)序列插入到中间载体pMP3上,成功构建中间载体pMP3-G,然后将中间载体pMP3-G和植物载体pCAMBIA1300通过双酶切、连接,成功地构建了植物表达载体pCAMBIA1300-G。挑选空白未转基因水稻(Oryza sativa)种子TP309消毒,在愈伤诱导培养基上31℃光照3 d,使其长出愈伤组织,用已经转入狂犬病G基因的根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105去侵染愈伤组织,并与愈伤组织共培养3 d,将狂犬病G基因导入水稻愈伤组织中。愈伤组织再经过潮霉素抗性筛选、分化、出芽、生根,获得313株植株,取313株植株的叶片通过十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyl trimethyl ammonium bromide, CTAB)法提取叶片基因组DNA,对其进行PCR扩增,经核酸胶进行初步鉴定,有79株为阳性,经过炼苗、种植共获得50株阳性表达植株。分别随机挑选50株阳性植株的种子,切半,标记,将不含胚乳的一半研磨,用提取液提取蛋白后通过抗原检测试纸条和Western blot检测,结果表明,G蛋白在转基因水稻种子中成功表达,且具有良好的反应原性。从50株阳性表达植株中挑选出高表达、反应原性最好的4个株系,将这4个株系T1代中与检测阳性结果相对应的含有胚乳的另一半种子进行组织培养种植,在植株移栽大田前后,再次用CTAB法提取T1代植株叶片基因组DNA,并以水稻的内源基因水稻淀粉分支酶基因(rice starch branching enzyme,RBE4)为内参基因,通过相对荧光定量PCR(relative fluorescence quantitative PCR)方法筛选阳性植株中的纯合植株,通过绝对荧光定量PCR(absolute real-time PCR)计算纯合植株的拷贝数,结果显示,132株植株中35株为纯合植株。纯合植株的拷贝数分别为1、2、3、5、7、11、16。本研究为今后制备新型狂犬病亚单位疫苗奠定基础。

关键词： 狂犬病病毒 G基因 转基因水稻 荧光定量 纯合子 拷贝数

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青麦粉添加对馒头面团及面筋蛋白结构的影响

张康逸; 康志敏; 王继红; 高玲玲; 温青玉; 郭东旭; 《现代食品科技 》 2019 北大核心

摘要：以馒头专用粉及青麦粉制作青麦馒头,利用激光共聚焦显微镜、黏度仪、红外光谱仪等分析仪器进行测定,探究不同青麦粉添加量(0%、5%、10%、15%、20%)对面团粉质特性、糊化特性、微观结构及面筋蛋白二级结构的影响。结果表明,随着青麦粉添加量的增加,混合粉湿面筋含量、面筋指数减少;糊化温度、峰值黏度降低,面团糊化时间缩短,面团稳定时间从6.18 min降至4.92 min、粉质质量指数减小了18,面筋强度变弱,承受力变差;面团拉伸面积、延伸度和最大拉伸阻力在135 min时显著减小;面筋网络结构逐渐出现孔洞,分布不均匀;面团面筋蛋白各吸收峰都发生了偏移,β-折叠和α-螺旋结构含量增加;综上所述,青麦粉的加入改变了面团特性和面筋蛋白结构,这些变化可能是导致青麦馒头品质下降的主要原因。

关键词： 青麦粉 馒头 面团 面筋蛋白二级结构

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响应面法优化香菇柄酒精发酵工艺

魏书信; 刘丽娜; 崔国梅; 许方方; 李顺峰; 田广瑞; 《中国酿造 》 2019 北大核心

摘要：为充分利用香菇产业副产物香菇柄,该研究以香菇柄为原料发酵制备酒精,并优化其发酵工艺条件。先通过Plackett-Burman试验研究影响酒精度的8个因素,并筛选出3个具有显著影响的因素;再通过最陡爬坡试验确定3因素的最适范围;最后利用BoxBehnken试验进行香菇柄酒精发酵工艺优化。结果表明:香菇柄粉添加量、发酵温度、初始pH值3因素对香菇柄酒精发酵影响最大,优化的发酵工艺参数为:香菇柄根粉用量3.7%、发酵温度31℃、初始pH值7.3、原料粉碎度60目、磷酸二氢钾添加量0.15%、葡萄糖添加量22%、酿酒曲接种量0.3%、发酵时间72h。在此优化条件下,平均酒精度为11.32%vol。

关键词： 香菇柄 酒精 发酵 工艺优化 Plackett-Burman试验设计 响应面法

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猪细胞因子信号传导抑制因子1蛋白的表达纯化与多克隆抗体制备

夏爽飞; 陈鑫鑫; 乔松林; 柴书军; 罗雪刚; 谢莎; 张改平; 《中国兽医科学 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：为制备猪细胞因子信号传导抑制因子1(SOCS1)的多克隆抗体,采用RT-PCR扩增猪SOCS1基因序列,将其克隆至原核表达载体pET-28a(+),构建重组表达载体pET28a-pSOCS1,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,在不同温度、IPTG浓度、诱导时间等条件下进行表达,确定最佳表达条件,并对重组蛋白pSOCS1进行纯化。以表达的重组蛋白pSOCS1免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,经4次免疫,间接ELISA测得抗体效价达到1∶51 200。Western-blot和间接免疫荧光试验结果表明,该多克隆抗体可与pSOCS1重组蛋白和经HEK293T细胞过表达的pSOCS1蛋白发生特异性反应,证明pSOCS1重组蛋白免疫原性良好。本研究为后续制备单克隆抗体、研究猪SOCS1相关作用机制奠定了基础。

关键词： 猪SOCS1 生物信息学分析 原核表达 多克隆抗体

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黄曲霉毒素B_1单克隆抗体的制备及基于该抗体的黄曲霉毒素B_1免疫学检测方法的建立

姚静静; 胡骁飞; 韩俊岭; 徐帆; 滕蔓; 邢云瑞; 孙亚宁; 邓瑞广; 张改平; 《动物营养学报 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：为了快速准确检测粮食与饲料中黄曲霉毒素B_1(AFB_1)含量,本试验制备了具有高灵敏度的AFB_1单克隆抗体,并将其应用于AFB_1间接竞争酶联免疫吸附测定(ELISA)方法的建立。采用碳二亚胺(EDC)法制备AFB_1完全抗原[AFB_1-牛血清白蛋白(BSA)和AFB_1-鸡卵白蛋白(OVA)],并免疫B_ALB/c小鼠。经细胞融合,筛选出能够分泌高灵敏度AFB_1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。采用体内诱生腹水法,大量制备AFB_1单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。基于制备的AFB_1单克隆抗体,建立AFB_1间接竞争ELISA检测方法。结果显示:通过筛选,获得稳定产生抗体的杂交瘤细胞株9H1F5,经间接ELISA方法测定,获得的AFB_1单克隆抗体的效价高达5.12×105,亲和力常数(Ka)=6.72×107L/mol,抗体亚型为免疫球蛋白G_2(IgG_2)。采用间接竞争ELISA方法测得AFB_1的半数抑制浓度(IC_(50))为0. 232 ng/mL,检测范围为0.014～1.920 ng/mL,最低检测限为0.014 ng/mL。同时,该AFB_1单克隆抗体与黄曲霉毒素B_2(AFB_2)、黄曲霉毒素G_1(AFG_1)、黄曲霉毒素G_2(AFG_2)、黄曲霉毒素M1(AFM1)的交叉反应率分别为40.21%、33.19%、31.96%、4.40%,与其他霉菌毒素无交叉反应。由上述结果可知,本试验成功制备了灵敏度高、特异性强的AFB_1单克隆抗体,并基于该抗体建立了检测AFB_1的间接竞争ELISA方法,为粮食与饲料中AFB_1快速免疫学检测奠定了基础。

关键词： 黄曲霉毒素B_1 细胞融合 单克隆抗体 ELISA

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豫南地区白菜-西瓜-甘蓝一年三熟高效栽培技术

王志勇; 高冠英; 赵艳艳; 原玉香; 张晓伟; 杨爱军; 魏小春; 杨双娟; 《北方园艺 》 2019 北大核心

摘要：新野县地处河南省南阳盆地,土层深厚,温暖湿润,四季分明,光、热、水资源丰富,是全国优质蔬菜生产基地示范县,也是河南省露地蔬菜生产最大县,蔬菜种植面积稳定在2万hm2。该区菜农采用的白菜-西瓜-甘蓝一年三熟高效栽培模式,667m2总产值达12 000元,纯收入近10 000元,目前发展到近1 000km2,因其投入较少,是当地农民收益较高的种植模式。

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北方春玉米区亚洲玉米螟对Bt玉米的抗性风险分析

黄运新; 封洪强; 吴孔明; 《植物保护学报 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：为了解我国北方春玉米区种植Bt玉米条件下主要靶标害虫亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis的Bt抗性风险,探索合理的Bt玉米种植比例,根据亚洲玉米螟的特点构建种群动态与遗传模型,对不同的Bt玉米种植比例进行分析评估。结果显示,当以种子混合种植75%的Bt玉米+25%的非Bt玉米庇护所时,亚洲玉米螟的种群控制时间,即亚洲玉米螟种群密度下降到每百株玉米植株30头幼虫以下的时间,为1～2年,而害虫的抗性时间,即亚洲玉米螟种群抗性基因频率达到50%的时间,在1代区为40年、在2代区为20年。当以种子混合种植20%、15%、10%、5%的非Bt玉米庇护所时,亚洲玉米螟的种群控制时间仍为1～2年,而害虫的抗性时间缩短,在1代区分别是29、21、15、9年,在2代区分别是14、10、7、4年。表明在研究区域内以种子混合种植20%以上的非Bt玉米庇护所可维持对亚洲玉米螟的Bt抗性管理至少14年。

关键词： Bt玉米 亚洲玉米螟 种群控制 抗性演化 模型分析

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猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白单抗的制备与鉴定

黄晓静; 李睿; 乔松林; 杨艳艳; 邓瑞广; 张改平; 《中国兽医科学 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：为制备及鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)主要结构糖蛋白GP5单克隆抗体,本研究首先利用切向流系统和琼脂糖凝胶层析对PRRSV高致病性毒株HN07-1进行纯化;将纯化后的病毒作为免疫原免疫小鼠;取免疫后的小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞进行融合;通过免疫过氧化物酶单层细胞试验对杂交瘤细胞株进行检测及筛选;利用重组GP5蛋白对阳性单克隆上清进行免疫印迹分析鉴定;经激光扫描共聚焦显微术和流式细胞术进一步鉴定单抗与病毒的结合特性.本研究共筛选到4株针对GP5蛋白的单克隆抗体,分别被命名为2D1G11、2D1C1、4H9D1和8B9D4;通过激光共聚焦显微镜观察发现,以上这4株GP5单抗均可以与病毒特异性结合;进一步通过流式细胞术检测发现,这4株GP5单抗与病毒的结合能力超过N单抗.通过亚型鉴定发现,2D1G11、2D1C1属于Ig G2亚型,4H9D1、8B9D4为Ig G1亚型.PRRSV GP5蛋白特异性单抗的成功制备,为PRRSV快速诊断试剂研制及免疫识别研究提供了分子手段和工具支持.

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5 单克隆抗体

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烟草疫霉菌拮抗细菌的筛选鉴定及发酵条件优化

李小杰; 李成军; 刘红彦; 邱睿; 赵辉; 陈玉国; 胡亚静; 刘畅; 白静科; 李淑君; 《中国烟草科学 》 2019 北大核心 CSCD

摘要：为了筛选对烟草疫霉菌具有拮抗作用的生防细菌菌株,本研究从烟草黑胫病病圃地采集健康烟株的根际土样,采用对峙培养法筛选得到8株对烟草黑胫病具有拮抗作用的细菌菌株,其中编号为LB-9的菌株对烟草疫霉菌的抑制作用最强且效果稳定,抑菌率为60.6%,且抑菌谱广,对其进行16S rRNA基因序列分析后将该菌株鉴定为多粘芽孢杆菌。采用单因素优化试验初步探究了多粘芽孢杆菌LB-9的最适发酵条件,明确了LB-9的最适发酵培养基、最适发酵温度、最适发酵时间和最适发酵初始pH值,对其生防制剂的开发应用具有重要意义。

关键词： 烟草疫霉 拮抗细菌 筛选鉴定 发酵条件

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