科研产出
适用于分子育种的玉米种子无损基因型鉴定技术优化
《分子植物育种 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：随着分子标记技术的快速发展,分子标记辅助育种已被广泛应用于玉米育种,迫切需要高通量、高效的技术方法。基于单粒种子苗前的分子生物学分析来预测表型性状是提高分子标记辅助选择效率的方法,但还需要发展一种切实有效的方法来保证苗前的分子生物学分析和种子播种后的正常发芽及生长。本研究通过对玉米单粒种子进行切取部分胚乳取样,对样品进行CTAB和碱煮法DNA提取的比较,而后对切去部分胚乳的种子进行包衣处理,然后对正常种子(T1)、只切除部分胚乳的种子(T2)、只包衣的种子(T3)以及既切除部分胚乳又包衣的种子(T4)进行室内沙盘发芽试验和田间种植试验分析,结果表明通过包衣的方法可以提高切除部分胚乳种子的发芽率,室内和田间试验中T4处理和T1处理的发芽率、株高及简易活力指数基本相近,差异均不显著。T4处理在室内和田间试验中的发芽率比T2处理分别提高了3.35%和14.90%,差异分别达到显著和极显著水平;T4处理的株高和简易活力指数均比T2处理的高,差异均达到了极显著水平。切除部分胚乳又包衣种子的发芽率高于国家标准发芽率,十天后的株高、简易活力指数基本达到正常种子的水平。对切除部分胚乳的种子包衣的方法可以解决播种前的分子生物学方面的检测又能使种子正常的发芽及生长,大大提高了玉米分子育种效率。
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豆粕提取物对肉仔鸡养分表观代谢率及消化酶活性的影响
《饲料工业 》 2015 北大核心
摘要：文章旨在探讨日粮中添加不同水平豆粕提取物对肉仔鸡养分表观代谢率及肠道消化酶活性的影响。将600只1日龄艾维茵肉仔鸡随机分成5个处理,每个处理4个重复,每个重复30只;在玉米-豆粕型基础日粮中分别添加0(对照)、250、500、750、1 000 mg/kg 5个水平的豆粕提取复合物。试验结果表明:日粮中添加500、750、1 000 mg/kg豆粕提取物可提高肉仔鸡粗蛋白表观代谢率(P<0.05)和α-淀粉酶活性(P<0.01)、脂肪酶活性(P<0.05)及总蛋白水解酶活性(P<0.05);500 mg/kg组可显著提高粗脂肪表观代谢率(P<0.05);当添加量达到1 000 mg/kg时,上述各项指标均表现不同程度下降的趋势,但差异不显著(P>0.05)。综合考虑各研究因素影响,建议在玉米-豆粕型肉仔鸡日粮中豆粕复合提取物的适宜添加水平为500~750 mg/kg。
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北方地区不同花生(Arachis hypogea L.)品种结荚期光合日变化的比较研究
《内蒙古农业大学学报(自然科学版) 》 2015 北大核心
摘要：在大田条件下,采用Li-6400光合测定系统于花生结荚期测定北方地区4种花生品种的光合日变化,并通过相关分析探讨了各环境因子对净光合速率的影响。结果表明:4种花生品种叶片净光合速率(Pn)日变化均呈双峰曲线,峰值分别出现在12:00和16:00,具有光合"午休"现象。其中LH12和HY22光合午休主要是气孔限制引起,而HY20和HY16光合午休的主要是非气孔限制引起。由此可见不同花生品种,其光合日变化"午休"限制因子不同;4种花生品种蒸腾速率(Tr)日变化呈单峰、双峰两种曲线类型。HY20和HY16蒸腾速率日变化呈双峰曲线,而LH12和HY22蒸腾速率日变化呈单峰曲线。相关分析表明,4种花生品种净光合速率、蒸腾速率与气孔导度(Cond)都呈极显著或显著正相关,与大气CO2浓度(Ca)都呈极显著或显著负相关。Tr、Cond和Ca是影响花生光合速率日变化的主要因子。
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玉米AGPase-bt2与GPN1蛋白互作的双分子荧光互补技术研究
《西北农林科技大学学报(自然科学版) 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：【目的】解析玉米淀粉合成限速酶ADP-葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase-bt2)与糖酵解关键酶甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GPN1)在植物体内是否存在相互作用。【方法】首先克隆获得AGPase-bt2和GPN1基因,然后采用双分子荧光互补技术(BiFC),构建326-CYCHA-AGPase-bt2和326-CYNEE-GPN1双分子荧光表达载体,转化农杆菌EHA105,并用2种载体共同瞬时侵染烟草叶肉细胞,48h后在激光共聚焦显微镜下观察AGPase-bt2与GPN1的相互作用。【结果】AGPase-bt2基因长1 428bp,GPN1基因长1 497bp。双酶切鉴定结果表明,326-CYCHA-AGPasebt2、326-CYNEE-GPN1载体构建正确;PCR结果证实,植物表达载体成功转化到农杆菌EHA105中;携带有共转化基因的烟草叶肉细胞在激光共聚焦显微镜下观察到明显的黄色荧光现象,且黄色荧光与叶绿体自发的红色荧光位置重合。【结论】AGPase-bt2与GPN1在植物细胞中真实地存在蛋白互作。
关键词： AGPase-bt2 GPN1 双分子荧光互补技术 蛋白质互作
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miR-141-3P和miR-346在对靶基因FSHR的识别与验证
《中国兽医学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：为探索miRNA-141-3P和miRNA-346在大鼠腺垂体中的靶基因,并对其进行识别与验证。本研究利用PCR方法,根据Fshr(Rattus)3′UTR野生型载体序列信息设计突变引物将靶序列CAGTGTT(78-85)突变为GTCACAA和GGCAGAC(127-133)突变为CCGTCTG,以野生型载体为模板PCR扩增Fshr基因的3′UTR突变序列,将其克隆到pmiR-RB-REPORTTM双荧光素酶报告载体中。由于miRNA是通过3′UTR区作用于靶基因,因此将miRNA与构建好的报告基因载体共转,通过报告基因相对荧光值的下调来印证miRNA与靶基因的相互作用。双荧光素酶报告基因表达分析显示,rno-miR-141-3p mimic对Fshr野生型载体的报告荧光没有明显下调作用;rnomiR-346mimic对Fshr野生型载体的报告荧光有明显下调作用,相应结合位点突变后,突变型载体中的报告荧光与野生型相比有所恢复;rno-miR-141-3p mimic和rno-miR-346mimic同时处理,对野生型载体的报告荧光有一定的下调作用。在体外,rno-miR-141-3p可能不能通过Fshr上相应的3UTR位点调控报告基因的表达;rno-miR-346有可能通过Fshr上相应的3′UTR位点调控报告基因的表达。本试验为FSHR的转录后调控研究提供了理论依据。
关键词： 大鼠 腺垂体 微小RNA 繁殖调控 促卵泡素受体基因
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益生元低聚糖对发酵乳杆菌CH4的促生长作用
《吉林农业科学 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：内蒙古奶豆腐中分离的一株优良益生特性的乳杆菌菌株CH4经API 50 CHL和16S r DNA序列分析鉴定为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)。本研究分析了益生元对CH4生长的促进作用。单因子试验表明,棉籽糖对CH4的促生长能力最强,添加量为1.5%,培养时间为10 h有利于菌株CH4的生长。利用正交试验进行验证,最终确定发酵乳杆菌CH4的生长条件为:培养基中添加1.5%棉籽糖,培养11 h,发酵乳杆菌CH4的活菌数达到8.65×1010CFU/m L,与未添加低聚糖培养时相比提高40倍。
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链霉菌769胆固醇氧化酶基因克隆、表达及生物学活性分析
《中国生物防治学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：胆固醇氧化酶(cholesterol oxidase,EC 1.1.3.6)是胆固醇降解代谢过程中的关键酶,在食品开发、医疗保健、临床检测、生物农药等方面具有广泛的应用价值。通过PCR方法从链霉菌Streptomyces ahygroscopicus 769的基因组中扩增得到769_Ch OA基因(Gen Bank accession No.KF290994)。该基因全长为1578 bp,编码一个由525 aa组成的蛋白质,蛋白理论分子量为57 k Da,等电点为6.29。769_Ch OA与来源于S.natalensis的胆固醇氧化酶基因的同源性为91%。构建了硫氧还蛋白-769_Ch OA融合的表达载体p ET32a::769_Ch OA,以Escherichia coli Origami B(DE3)为表达宿主,获得了能可溶性表达的胆固醇氧化酶重组菌。经Ni亲和层析纯化得到的酶蛋白比活力为5.90 U/mg。酶学性质分析表明,该酶对胆固醇的催化活性最高,对测定的7种胆固醇类似物也都具有一定的催化能力。酶的最适温度和p H范围为20~40℃和p H 6.0~8.5,其活性均高于80%,且在30℃和p H 7.0时表现出最大的活性,酶活分别达到6.83和6.44 U/mg。酶在低于40℃和弱碱性条件下具有很好的稳定性。该酶对鳞翅目害虫亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis(Guenée)和水稻二化螟Chilo suppressalis(Walker)幼虫具有很强的杀虫活性,半致死浓度分别为27.4和17.1μg/m L。
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农田不同耕层构造对玉米生长发育及产量的影响
《干旱地区农业研究 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：在公主岭市吉林省农科院长期定位试验田(1983年)4种耕层构造(上虚下实、全虚耕层、全实耕层和虚实并存)上,通过对玉米出苗率、株高、茎粗、叶片数、叶面积、根系及产量指标测定,探讨不同耕层构造对玉米生长发育及产量的影响。结果表明,虚实并存耕层玉米出苗率为94.90%,明显高于其他耕层,增加苗期玉米株高和茎粗,叶片数较全虚耕层和上虚下实耕层分别增加0.8和1.2片,但与全实耕层相比差异不明显。从玉米生育中后期来看,虚实并存耕层促进玉米生长发育,增加叶面积,改善根系性状,与上虚下实耕层比较,根条数增加16.80条,气生根和地下根干重分别增加4.60 g和20.50 g,且气生根层数增加0.80层。同时,虚实并存耕层玉米产量显著高于其他耕层,增产幅度为8.17%~15.02%,上虚下实耕层产量最低。可见,虚实并存耕层"既发小苗,又发老苗",稳产高产,是较为理想的耕层构造。
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华南大豆重要农艺性状与SSR的关联分析
《贵州农业科学 》 2015 北大核心
摘要：为挖掘大豆数量性状基因,选取具有代表性的160份华南大豆地方品种,并选用159对SSR标记,结合生育期、株高、主茎节数、品质等性状的表型数据,应用关联分析方法发掘与品质性状相关联的SSR标记位点。结果表明:共检测到625个等位位点,平均等位位点变异数为4.93个,基因多样性的范围为0~0.828 9,平均值为0.477 8;PIC值与基因多样性值的表现较为一致,平均值为0.430 6。关联分析表明,广东、广西、湖南3省均被检测到的关联位点有12个,其中与花期相关联的位点有5个,与熟期相关联的位点有4个,与株高相关联的位点有4个,与主茎节数相关联的位点有2个,与蛋白含量相关联的位点有1个,与油脂含量相关联的位点有2个。
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