科研产出
稻曲病菌的SCAR标记及其PCR检测
《植物保护学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：为建立稻曲病菌Ustilaginoidea virens快速、灵敏的PCR早期检测技术,以S380为引物,对稻曲病菌和其它参试病原菌的DNA进行RAPD-PCR扩增。稻曲病菌RAPD特异片段经回收、克隆和测序后,根据序列用Primer 5.0软件设计了特异性SCAR引物US-SF(5'-TCGCCTCAGACCTCAATC-3')/US-SR(5'-GAGCCTCAAATGCCTTCC-3')和巢式PCR引物US-NF(5'-AGCGTCTCCTGCAACCAC-3')/US-NR(5'-GAGCCTCAAATGCCTTCC-3')。利用引物US-SF/US-SR通过常规PCR对供试稻曲病菌均可扩增出1条大小约257 bp的清晰条带,对其它植物病原菌DNA的PCR产物均无扩增条带,最低可检测到1 pg/μL的病菌基因组DNA;而利用引物US-SF/US-SR和US-NF/US-NR通过巢式PCR可从10 fg/μL的病菌基因组DNA中扩增出1条大小约210 bp的特异性条带。试验表明,巢式PCR检测灵敏度比常规PCR提高了100倍,且巢式PCR可从接菌的水稻幼颖和自然感染的谷粒中检测出稻曲病菌。
关键词： 水稻 稻曲病菌 RAPD特异片段 SCAR标记 PCR检测
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建兰胶孢炭疽菌ITS序列分析及其PCR快速检测
《植物保护学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：由胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides引起的炭疽病是建兰的重要病害。为建立快速检测该病原菌的方法,以ITS1/ITS4为引物,对15个建兰胶孢炭疽菌的ITS进行PCR扩增及测序,将测定的序列与炭疽菌属其它种的ITS序列进行比对分析,设计特异性引物CF1/CR1,并通过常规和巢式PCR对建兰胶孢炭疽菌进行检测。结果显示,15个菌株中有13个菌株ITS序列与该菌的模式种序列相似性高达99%以上,而另外2个菌株相似性则为86%;供试菌株在系统发育树上聚为2个不同的分支;引物CF1/CR1通过常规PCR可从1 ng的建兰胶孢炭疽菌基因组DNA中扩增到目的条带,而利用引物ITS1/ITS4和CF1/CR1通过巢式PCR可从1 pg的基因组DNA中扩增到目的条带,即巢式PCR反应检测灵敏度较常规PCR至少高1000倍。研究表明建立的巢式PCR法可从自然感病的建兰叶片组织中检测到胶孢炭疽菌。
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枯草芽孢杆菌CS16抑菌活性与胞外产物成分分析
《热带作物学报 》 2013 CSCD
摘要：通过测定枯草芽孢杆菌CS16菌株的抑菌活性,对其胞外代谢物活性与成分进行分析,以期开发有效的生防菌剂。结果表明:CS16菌株对多株植物病原真菌具有明显的抑制作用,对病原细菌的抑菌作用相对较弱;CS16发酵液中羧甲基纤维素酶、淀粉酶和木聚糖酶活力分别为509.58 U/mL、7 198.71 U/mL和1 853.68 U/mL;其发酵液经酸沉淀所得粗提物可明显抑制香蕉枯萎病菌丝生长,最小抑菌浓度为0.062 5 mg/mL;利用反相硅胶柱、Sephadex LH-20凝胶柱和正相硅胶柱分离纯化获得较纯的抑菌物质,经薄层层析和HPLC定性分析,初步认为其胞外抑菌物质中含有Iturin A。
关键词： 枯草芽孢杆菌 抑菌活性 最小抑菌浓度 脂肽 分离纯化
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不同种质来源孩儿参的rDNAITS区序列分析及鉴别
《中草药 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：目的通过分析不同种质来源孩儿参ITS序列,为孩儿参种内鉴别提供DNA分子标记。方法利用特异性引物进行PCR扩增、克隆和测序,对孩儿参的rDNA ITS区间碱基序列进行测定,比较其差异。结果参试的9个不同种质来源孩儿参的整个ITS长度变异为623～624 bp;其中ITS1为224 bp,G+C量为52.91%～54.26%;5.8 SrDNA为155 bp,G+C量为54.49%～55.13%;ITS2为244～245 bp,G+C量为55.55%～56.41%。整个ITS区共有17个变异位点(2.72%),ITS1、ITS2和5.8S的变异位点分别为7、7和3个,不同种质来源孩儿参均有若干个特异性的单核苷酸变异位点;各样品的序列同源性均在99.9%以上;序列间的遗传距离为0.003～0.013。显示了不同产地、不同种质孩儿参的变异是不超过1个种的范围内的变异。结论可利用ITS区序列差异,鉴别不同种质来源的孩儿参。
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UPLC测定草莓果实中类胡萝卜素含量
《果树学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：【目的】为了获得适宜进行草莓果实类胡萝卜素各组分定性定量分析的方法,【方法】以成熟草莓果实为材料,通过对不同提取剂、提取方法的筛选,优化草莓果实类胡萝卜素的提取条件;通过确定色谱条件以及重复性、精密度、回收率试验,建立类胡萝卜素超高效液相色谱法标准分析体系。【结果】以丙酮∶石油醚=1∶2作为提取剂,皂化提取草莓果实中类胡萝卜素,同时采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱,以乙腈∶甲醇=9∶1为流动相,在450 nm下测定是进行草莓果实类胡萝卜素定性定量分析的最佳方法。成熟草莓中能检测到叶黄素、β-隐黄质、β-胡萝卜素,含量依次为:118.5、12.6、99.8μg.kg-1;检测不到番茄红素;检测可以在5 min内完成,比常规方法节约时间70%左右;方法平均回收率达到93.2%,变异系数为1.32%～1.86%。【结论】提取方法和超高效液相色谱法标准分析体系适合草莓果实类胡萝卜素各组分的定性定量分析。
关键词： 草莓 类胡萝卜素 高效液相色谱法(UPLC)
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β-1,3-1,4-葡聚糖酶在毕赤酵母中的克隆与表达
《食品工业科技 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：β-1,3-1,4-D-葡聚糖酶是一类专一性降解β-1,3-1,4-葡糖苷键中的β-1,4-糖苷键,产生小分子还原糖的水解酶,广泛应用于啤酒工业和饲料工业中.本研究根据毕赤酵母密码子偏好性优化β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因序列,采用PCR法将其插入毕赤酵母表达载体pPICZαA,经SacI线性化后电击整合入毕赤酵母X-33基因组,构建重组酵母;经菌落PCR验证和摇瓶筛选,获得一株X-33/pPICZαA-bgl,甲醇诱导96h后,酶活力达308.5U/mL,经SDS-PAGE电泳,实际蛋白分子量约为33ku.β-1,3-1,4-D-葡聚糖酶最适反应pH为5.0,最适反应温度为50℃.
关键词： 毕赤酵母X-33 β-1 3-1 4-葡聚糖酶 诱导
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双氰胺单次配施和连续配施的土壤氮素形态和蔬菜硝酸盐累积变化
《生态学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：采用田间试验研究了双氰胺(dicyandiamide,缩写DCD)单次配施和连续配施的土壤氮素形态和蔬菜硝酸盐累积变化。结果表明,与单施化肥相比,DCD单次配施的长期叶菜甘蓝生长过程中土壤铵态氮含量增幅为21.3%—339.4%,土壤硝态氮和菜体硝酸盐含量降幅分别为5.4%—80.2%和4.4%—58.3%;短期叶菜空心菜收获时土壤铵态氮含量增加了299.4%,土壤硝态氮和菜体硝酸盐含量分别降低了26.2%和31.7%。DCD连续配施的"甘蓝-菠菜-空心菜-萝卜-大白菜"种植体系中,土壤铵态氮、硝态氮和菜体硝酸盐含量均呈累积的趋势,配施DCD的土壤铵态氮含量从略高于化肥处理(44.0%)发展到极显著高于化肥处理(392.5%,P<0.01),土壤硝态氮含量从极显著低于化肥处理(-68.2%,P<0.01)发展到显著高于化肥处理(146.6%,P<0.05),菜体硝酸盐含量从显著低于化肥处理(-30.2%,P<0.05)发展到极显著高于化肥处理(40.4%,P<0.01)。由此可见,DCD单次配施可显著降低菜体硝酸盐含量,而连续配施DCD的土壤能维持一定量的铵态氮水平,这些盈余的铵态氮会进一步转化为硝态氮残留在土壤中,并可能产生蔬菜硝酸盐累积的风险。
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福建省部分地区马铃薯致病疫霉群体遗传多样性分析
《激光生物学报 》 2013 CSCD
摘要：致病疫霉(Phytophthora infestans)引起的晚疫病是马铃薯的一种毁灭性病害。有效控制马铃薯晚疫病需要明确致病疫霉的群体遗传结构特征。采用8对SSR引物对采自福建省福州、长乐、漳州2010年分离的95株马铃薯致病疫霉进行遗传多样性分析。结果共检测出21个等位基因和26个基因型。三个地点致病疫霉菌群体间的平均遗传分化系数FST为0.22,在8个位点中有5个位点的等位基因频率分布差异显著。三个群体的观测纯合度小于期望纯合度,观测杂合度大于期望杂合度,以无性生殖为主。结果表明福建群体的遗传多样性高,群体间的存在较高的遗传分化度。
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烟叶及提取物中茄尼醇的高效液相色谱标准化测定方法研究
《中国烟草科学 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：为了更好地理解和应用笔者制定的国家标准《烟叶和烟叶提取物中茄尼醇的测定-高效液相色谱法》,笔者详细说明了该方法的技术要点,筛选出最佳的提取条件和皂化条件。高效液相色谱检测条件为:采用Waters Atlantis T3-C18柱(4.6×150 mm,3μm),柱温35℃;以异丙醇-甲醇(体积比为30∶70)为流动相,流速为1.0 mL/min;采用二极管阵列检测器,检测波长213 nm。实验结果表明,该方法对茄尼醇的检出限为1 mg/kg,在0.1~5.0 g/100g线性范围内,茄尼醇含量与峰面积的相关系数达0.9999以上;方法加标回收率达到95%以上;相对标准偏差小于5%(n=6)。该方法快速、简便、具有良好的精密度和准确性。
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