科研产出
猪流行性腹泻病毒流行株S蛋白高变区B细胞线性表位肽的鉴定
《微生物学通报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：【背景】对猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)经典毒株与流行毒株S蛋白氨基酸序列比对显示,变异位点主要集中在S蛋白的N端。【目的】鉴定PEDV流行毒株S蛋白高变区(S10A,1-496 aa)的B细胞线性表位肽,特别是流行毒株特异性B细胞表位肽。【方法】以SDS-PAGE割胶纯化大肠杆菌表达的PEDV流行株SD2014 S蛋白高变区片段(S10ASD2014),免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体;在E. coli中谷胱甘肽巯基转移酶(Glutathione S-transferase,GST)融合表达覆盖S10ASD2014序列全长且彼此重叠8个氨基酸残基的系列16肽。以制备的抗S10ASD2014多抗为一抗,通过Western blot筛选系列16肽中的阳性反应性16肽,鉴定S10ASD2014上的B细胞线性表位肽;利用抗PEDV经典毒株(CV777)S蛋白高变区片段(S10ACV777)多抗血清鉴定S10ASD2014上的保守性B细胞线性表位肽。【结果】重组表达的S10ASD2014相对分子质量约为72 kD;纯化的S10ASD2014表位肽能被PEDV阳性血清识别。制备的抗S10ASD2014多抗可以识别PEDV DR13弱毒株。利用抗S10ASD2014血清和抗S10ACV777血清从61个GST融合表达的16肽中鉴定到28个阳性反应16肽,其中13个为2种血清共同识别16肽。对24株PEDV不同亚群代表毒株的对应区域进行同源性分析表明2个阳性16肽为保守性表位肽。【结论】确定了PEDV流行株SD2014 S蛋白高变区的B细胞线性表位肽,B细胞线性表位肽,特别是流行毒株特异性表位肽的确定有助于了解S蛋白的结构与功能,为建立以表位为基础的PEDV感染检测方法打下良好基础。
关键词： 猪流行性腹泻病毒 纤突蛋白高变区 多克隆抗体 B细胞线性表位
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不同防霉剂对发酵饲料的防霉效果比较
《畜牧与兽医 》 2019 北大核心
摘要：本试验旨在比较几种防霉剂对非密封状态下乳酸菌发酵饲料的防霉效果。试验选用丙酸钙、柠檬酸、双乙酸钠或山梨酸钾四种添加剂,按不同比例分别加入发酵饲料中混匀后置于普通培养皿中,在28℃和相对湿度为72%的恒温箱中储存30 d,分别在试验开始后第1、2、4、6、8、10、15和30天采集样品进行检测,根据观察结果选择效果较好的双乙酸钠和丙酸钙进行梯度添加试验,然后从效果较好的组中采样检测p H、乳酸、乳酸菌和霉菌数。4种防霉剂的比较结果显示,双乙酸钠和丙酸钙组到第6天仍未出现霉变,效果优于山梨酸钾和柠檬酸;梯度添加试验的结果显示,发酵饲料中添加2.00%的丙酸钙和0.30%的双乙酸钠可达到更好的防霉效果;在试验的第6天,添加0.30%的双乙酸钠组的乳酸含量显著高于对照组和添加2.00%的丙酸钙组(P<0.05);在实验的第8天和第10天,添加双乙酸钠和丙酸钙组的发酵饲料p H值显著低于对照组(P<0.05);在试验的开始后第1天和第6天,丙酸钙组的发酵饲料中的乳酸菌数量显著低于对照组和双乙酸钠组(P<0.05),且从第2天开始,双乙酸钠组和丙酸钙组的霉菌数量显著低于对照组(P<0.05)。综合添加剂的经济性和添加量,发酵饲料中添加0.30%的双乙酸钠,在6 d内可起到很好的防霉效果。
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影响鸡蛋产生暗斑的因素研究
《上海农业学报 》 2019
摘要：随着人们生活水平的不断提高,鸡蛋暗斑问题越来越受到消费者的关注。以新杨黑羽蛋鸡配套系祖代、父母代和商品代母鸡为试材,研究鸡蛋暗斑发生发展规律及其影响因素。在基础日粮中添加0 mg/kg(CK)、250 mg/kg、500 mg/kg和750 mg/kg的复合维生素,利用恒温恒湿培养箱设定不同的储存温度和湿度,观察不同维生素浓度和储存条件下鸡蛋暗斑的发生情况。结果表明:暗斑在鸡蛋储存4 d内发生,24 h内产生最多。新杨黑羽蛋鸡配套系的洛岛红鸡暗斑发生率极显著低于贵妃鸡。添加复合维生素能够极显著降低暗斑发生率(P <0.01),额外添加500 mg/kg复合维生素的鸡蛋暗斑率最低;不同储存温度湿度暗斑发生率存在显著性差异(P <0.01),4℃或者相对湿度90%储存时暗斑发生率最低,低于10%。
关键词： 鸡蛋暗斑 遗传 复合维生素浓度 鸡蛋储存条件 新杨黑羽蛋鸡
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双孢蘑菇发酵培养料细菌菌群结构及其功能预测
《食用菌学报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：为了解双孢蘑菇(Agaricus bisporus)培养料不同发酵阶段的细菌菌群组成,并对细菌菌群功能进行预测,采用近红外分析仪分别测定3个发酵阶段双孢蘑菇培养料中纤维素、半纤维素和木质素的含量,同时选用细菌16S rRNA基因V3-V4特异性引物分别对3个发酵阶段的培养料进行PCR扩增、建库和测序。采用QIIME软件对获得的序列进行归并和可操作分类单元(operational taxonomic unit,OTU)划分,分别对每个样本计算Chao1、ACE、Shannon和Simpson指数,并获取各样本在门、属分类水平上的组成和丰度分布表,使用R软件计算各样本共有OTU的数量,绘制样本在门、属分类水平的组成柱状图,通过Galaxy在线平台,提交属水平的相对丰度矩阵进行LEfSe分析,对未加权的UniFrac距离矩阵进行非度量多维尺度(nonmetric multidimensional scaling,NMDS)分析,通过PICRUSt软件将基因测序数据与代谢功能已知的微生物参考基因组数据库相比,预测细菌菌群代谢功能。结果表明:随着发酵次数的增加纤维素和半纤维素含量均呈下降趋势,而木质素含量二次发酵料高于一次料和三次料;3个阶段发酵培养料共有OTU数量为419个,其中一、二、三次发酵阶段独有的OTU数量分别为420、761和750个;二次料和三次料的细菌群落的丰富度和多样性均高于一次料; 3个阶段中丰度高的门为异常球菌-栖热菌门(Deinococcus-Thermus)、绿弯菌门(Chloroflexi)、变形杆菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)和放线菌门(Actinobacteria);在一次料中栖热菌属(Thermus)丰度较高,在二次料中假黄单胞菌属(Pseudoxanthomonas)和高温多孢菌属(Thermopolyspora)丰度较高,在三次料中假黄单胞菌属和螯台球菌属(Chelatococcus)丰度较高;一次料与二、三次料样本之间的细菌群落结构差异较大;二次料与三次料样本之间的细菌群落结构相似度高;3个阶段代谢通路排在前两位的均为氨基酸代谢和碳水化合物代谢。
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香菇失香突变菌株的营养成分和呈味物质分析
《上海农业学报 》 2019
摘要：在栽培条件一致的情况下,测定了'L808'和ww808(子实体无香菇香味)2个香菇菌株子实体的粗蛋白、水解氨基酸、游离氨基酸、可溶性糖(醇)、有机酸和5'-核苷酸的组成及含量,并分析其营养成分和呈味物质的差异。结果表明:'L808'和ww808菌株的氨基酸比值系数分分别为88.98和87.69,'L808'菌株的蛋白质营养价值高于ww808菌株;'L808'菌株可溶性糖(醇)及鲜味氨基酸含量高于ww808菌株,有机酸、甜味氨基酸以及鲜味核苷酸含量较ww808菌株低。综合各种呈鲜成分,'L808'和ww808菌株的等鲜浓度值(EUC)分别为38.70 g MSG/(100 g)和53.38 g MSG/(100 g),ww808菌株鲜味呈鲜效果较'L808'菌株更突出。
关键词： 香菇 子实体 呈味物质 等鲜浓度值(EUC)
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食用菌栽培基质中木质纤维素组分测定方法的建立
《食用菌学报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：为建立批量测定食用菌栽培基质中纤维素、半纤维素、酸不溶木质素的方法,在美国国家可再生能源实验室(national renewable energy laboratory,NREL)建立的方法的基础上,对硫酸浓度、反应温度、反应容器进行了调整。将NREL法中0.3 g样品于87 mL 4%(w/w)硫酸中121℃水解的反应体系改为0.1 g样品于10 mL 15.4%(w/w)硫酸中100℃水解,反应容器和加热容器分别由压力瓶和灭菌锅改为离心管和水浴锅。改进后的反应体系可以避免加热过程中酸液溢出,采用离心实现固液分离提高了测定效率。在新的反应体系中,确定了草菇(Volvariella volvacea)、香菇(Lentinula edodes)、金针菇(Flammulina velutipes)、双孢蘑菇(Agaricus bisporus)、斑玉蕈(Hypsizygus marmoreus)栽培基质的最适水解时间为1.5 h,刺芹侧耳(Pleurotus eryngii)、灵芝(Ganoderma lucidum)栽培基质的最适水解时间为2 h。通过比较新建立的方法与NREL建立的方法测定的纤维素、半纤维素、酸不溶木质素含量,表明改良后的新方法是可行的。
关键词： 木质纤维素 栽培基质 食用菌 美国国家可再生能源实验室
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盐胁迫下大麦酵母双杂交文库的构建与鉴定
《上海农业学报 》 2019
摘要：为研究盐胁迫下大麦耐盐相关蛋白的互作蛋白,利用Gateway技术构建盐胁迫下大麦的酵母双杂交文库。首先提取受盐胁迫的大麦总RNA,分离mRNA并合成双链cDNA,并通过位点特异重组系统(BP重组)将双链cDNA转入pDONR22载体,构建初级文库。然后,将初级文库质粒通过同源重组转入pGADT7-DEST载体,构建次级文库。最后,将次级文库质粒转入酵母菌株Y187中构建酵母双杂交文库。经鉴定,该酵母双杂交文库的滴度为7.0×10~7 CFU/mL,插入cDNA片段平均长度大于1 000 bp,重组率大于95.8%。所构建的酵母双杂交文库质量较高,可用于后续的互作蛋白筛选工作。
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