科研产出
酶联适配体可视化检测牛妊娠相关糖蛋白9(bPAG9)及其在奶牛早孕检测中的应用
《农业生物技术学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：免疫分析测定妊娠相关糖蛋白（pregnancy-associated glycoproteins, PAGs）是目前常用的家畜早期妊娠检测方法,但是抗体作为识别分子存在制备周期长、成本高等缺点。为丰富奶牛（Bos taurus）早期妊娠诊断技术,降低检测成本,本研究以牛（bovine）妊娠相关糖蛋白（bPAG）的核酸适配体为识别分子,基于双适配体夹心原理,建立了一种bPAG的可视化检测方法,并对适配体浓度、适配体-辣根过氧化物酶浓度、封闭剂浓度、反应时间、包被缓冲液等条件进行了优化。结果显示,在优化条件下,b PAG9在0.5～100ng/mL浓度范围内呈良好线性（R=0.998）,检测限为0.22 ng/mL,目测可视化检测限0.5 ng/mL。采用3个梯度浓度（1, 10, 100 ng/mL）的bPAG9做空白样品添加实验,平均加标回收率为93.2%～105.8%,相对标准偏差为3.51%～7.13%。将建立的方法应用于人工授精30 d后的奶牛血清检测,并采用超声波检测法进行对比验证,本方法妊娠诊断准确率达到91.7%。本研究为奶牛早期妊娠诊断提供一种简便、经济、可靠的快速检测新技术。
关键词： 妊娠相关糖蛋白（PAGs） 适配体 早期妊娠诊断 酶联适配体分析（ELAA） 奶牛
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转录组测序分析细粒棘球绦虫原头蚴刺激后巨噬细胞Raw264.7 IncRNA表达的研究
《中国预防兽医学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：为了解巨噬细胞Raw264.7在应对细粒棘球绦虫原头蚴（PSC）刺激时其长链非编码RNA（lncRNA）的差异表达规律,本研究采用Illumina Hiseq 3000高通量RNA sequencing测序技术对PSC处理以及PBS处理的Raw264.7细胞进行lncRNA测序和生物信息学分析后,进一步采用GO和KEGG数据库分别对差异表达的lncRNAs进行富集分析。结果显示,和PBS对照组相比,PSC处理组有60个lncRNA分子的表达出现显著差异变化,其中17个表达上调,43个表达下调。GO分析结果显示,差异表达的lncRNA分子的靶基因主要与钠离子跨膜转运体活性调节,2型免疫反应正向调节以及自然杀伤细胞凝集素样受体结合等相关;KEGG分析结果显示,差异表达的lncRNA分子的靶基因主要参与VEGF信号、Toll样受体信号通路、NOD样受体等信号通路。本研究进一步分析了与Raw264.7细胞固有免疫相关的lncRNA分子,结果发现有11个模式识别受体（PRR）相关的lncRNA分子。随机选取6个差异表达的lncRNA分子进行了qRT-PCR验证,结果显示其表达趋势与lncRNA测序结果一致。本研究首次系统解析了巨噬细胞Raw264.7应对PSC刺激时其lncRNA的差异表达谱特性,为进一步解析lncRNA在巨噬细胞Raw264.7应对PSC刺激时的免疫调控机制奠定了基础。
关键词： 细粒棘球绦虫 巨噬细胞Raw264.7 长链非编码RNA 固有免疫
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不同灌溉措施下春玉米干物质和养分积累分配特征及其与产量建成的相关性
《玉米科学 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：通过设置田间小区试验,以郑单958为试材,研究漫灌措施下灌溉量4 800（MI1）、7 200（MI2）m3/hm2和滴灌条件下灌溉量4 200（DI1）、4 800（DI2）、5 400（DI3）、6 000（DI4）m3/hm2不同处理玉米地上部干物质和养分的累积与分配特征。结果表明,不同灌溉措施植株总干物质量大小依次为MI2>DI3>DI4>MI2、DI2>DI1,以DI3处理穗干物质积累量最高,较其他处理提高16.62%～45.51%。两种灌溉方式下,随着灌溉量的增加,显著促进了植株N和K养分吸收,滴灌处理玉米穗位K养分积累效应更明显。滴灌处理玉米子粒产量显著高于漫灌处理,其中以DI3处理最高。穗干物质量和K养分积累量与子粒产量呈极显著正相关。滴灌模式下5 400 m3/hm2为新疆北疆地区春玉米适宜的灌溉措施。
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滴灌水肥一体化下氮磷减施对春小麦产量及养分利用的影响
《河南农业科学 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：设置不施肥处理（T1）、监控施肥处理（T2）、监控施肥不施氮肥处理（T3-N）、监控施肥不施磷肥处理（T4-P）和农户常规施肥处理（T5）,研究水肥一体化下氮磷减施对滴灌春小麦产量及养分利用的影响,以期为滴灌春小麦水肥一体化化肥减施提供科学依据。结果表明,合理的水肥运筹均能提高滴灌春小麦干物质积累量,T3-N和T4-P处理春小麦干质量相近,均较高,其次为T2处理。T2、T3-N和T4-P处理春小麦籽粒、颖壳、茎叶氮和磷含量总体上均高于T5和T1处理。与T5和T1处理相比,水肥一体化下氮磷合理配施的T2处理可显著提高春小麦产量,分别增产20.07%和33.44%;与T5处理相比,T2处理施N量减少25%、施P2O5量减少112%,而春小麦不减产,甚至有增产效果。与农户常规施肥处理相比,水肥一体化条件下的施肥处理（T2、T3-N、T4-P处理）均能提高氮肥和磷肥的农学效率、偏生产力、利用率。总体来看,水肥一体化条件下的施肥处理T2、T3-N、T4-P均可提高春小麦产量和肥料利用效率,并减少化肥施用量,达到了减肥不减产的目的。
关键词： 水肥一体化 氮磷减施 滴灌 春小麦 产量 养分利用
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不同覆盖物对夏黑葡萄关键生育期土壤温度和土壤水势的影响
《中国农学通报 》 2021 CSCD
摘要：覆盖是调节土壤温度、减少土壤水分无效蒸发的一种行之有效的手段,为探明不同覆盖物对夏黑葡萄开花期—成熟期内土壤温度和土壤水势的影响效果,本试验在夏黑葡萄园设置地布、黑棉毡、黑地膜覆盖和不覆盖(对照)4个处理,对各处理土壤温度和土壤水势的变化进行了比较研究.结果表明:与CK处理相比,T1、T2和T3处理均可以提高开花期土壤最低温度,分别提高0.55、0.87、3.25℃;T1处理使果实快速膨大期和着色期土壤最高温度降低,分别降低0.83℃和1.11℃,使土壤温度更接近根系适宜生长的温度环境;T2和T3处理则提高果实快速膨大期和着色期土壤最高温度,分别提高0.71、0.01℃和3.18、2.40℃.在相同灌水条件下,不同覆盖处理均可降低土壤水势日变化幅度,T1处理土壤水势在0~1kPa之间,基本呈饱和状态,T2、T3和CK处理不同生育期日最大土壤水势差分别为1.69~11.08、0.24~1.09、12.63~18.08kPa;不同覆盖处理提高最高和最低土壤水势,其中覆盖地布和黑地膜效果更显著.综合比较各种覆盖材料对土壤温度和土壤水势的影响效果,覆盖地布处理效果最好.
关键词： 覆盖物;地布;葡萄;土壤水势;土壤温度;日变化幅度
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噻虫嗪在棉叶中残留消解动态及对棉蚜的防治效果评价
《新疆农业科学 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：【目的】研究噻虫嗪种衣剂在棉叶中的消解动态,评价其对棉蚜的防治效果。【方法】采用QuEChERS-UPLC-MS/MS方法,定期测定棉叶中噻虫嗪的含量,田间调查噻虫嗪种衣剂对棉蚜防治效果。【结果】0.01～0.50 mg/L线性关系良好,相关系数r=0.999。在0.01、0.20、0.50 mg/kg添加水平下,噻虫嗪在棉叶中的平均回收率在93.4%～119.71%,相对标准偏差为0.34%～5.18%,方法检测限为0.001 mg/kg。噻虫嗪在棉叶中的消解动态符合一级动力学方程,半衰期为3.85～4.03 d。下部叶中噻虫嗪含量分别占各处理总浓度的59.42%～76.39%,噻虫嗪主要分布在下部叶片。出苗后30 d时,600 g/100kg处理防效最佳,仍可达87.90%。【结论】使用600 g/100kg浓度噻虫嗪种子处理,可较好地防治苗期蚜虫。
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萨福克羊呼吸道感染多杀性巴氏杆菌生物学特性研究
《中国预防兽医学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：为确定引起新疆石河子及周边地区因呼吸道感染致死的多胎萨福克羊细菌性病原及其生物学特性,本研究收集2018年2月～2020年1月期间7个规模化养殖场13份因呼吸道感染致死的多胎萨福克羊的肺、肝、脾、淋巴组织样品,采用常规细菌分离方法结合kmt基因检测方法分离鉴定出6株（46.15%）多杀性巴氏杆菌（Pm）;利用多重PCR检测分离株荚膜血清分型、脂多糖分型,结果显示荚膜血清D型2株（33.3%）、A型1株（16.7%）、未定型3株（50%）;脂多糖L3型3株（50%）、L6型2株（33.3%）、未定型1株（16.7%）;利用PCR方法检测分离株25种毒力基因、11种耐药基因,结果显示6株Pm毒力基因exbB、exbD、tonB、ompA、oma87、psl、sodC、plpB、fimA、fur、sodA检出率最高为100%,未检测到hsf1、hsf2、tbpA、plpE、ptfA、tadD、toxA基因,其中携带毒力相关基因pmHAS、hgbB、pfhA、ompH、nanB、nanH、hgbA的菌株数分别为5株（83.3%）、4株（66.7%）、4株（66.7%）、4株（66.7%）、4株（66.7%）、3株（50%）、2株（33.3%）。利用K-B纸片法检测分离菌株的耐药表型,结果显示所有菌株均对复方新诺明（磺胺类）耐药,对头孢菌素类药物中介;大部分菌株对青霉素、阿莫西林等19种抗生素敏感。6株Pm均携带喹诺酮类耐药相关基因blaTEM,未检测到其他耐药相关基因。分离菌株对磺胺类药物耐药性较强,但不携带磺胺类耐药基因,表明分离株的耐药性是由多种耐药机制共同作用的结果。本研究结果为Pm致萨福克羊呼吸道感染的流行病学和临床治疗提供参考依据。
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巴什拜羊不同发育阶段骨骼肌中miR-486靶基因的研究
《中国农业科学 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：【目的】为了深入挖掘巴什拜羊不同发育阶段骨骼肌中miR-486的靶基因,为最终阐明巴什拜羊优良肉质性状形成的分子调控机制奠定基础,同时为巴什拜羊的持续选育提供理论依据。【方法】分别采集了巴什拜羊胎儿期40,50,60,80,100和120 d,以及出生当天,出生后30,60和90 d共计10个不同发育阶段的骨骼肌组织,分别利用胎儿期6个阶段的混合mRNA和出生后4个阶段的混合mRNA构建了胎儿期和出生后骨骼肌中miR-486调控靶基因的cDNA文库,并利用高通量测序技术对cDNA文库中的靶基因信息进行了深入挖掘。在对所得候选靶基因功能分析的基础上,选择10个候选靶基因,使用qRT-PCR检测其在巴什拜羊上述10个不同发育阶段骨骼肌中表达量的变化,结合课题组前期获得的miR-486在巴什拜羊不同发育阶段骨骼肌中的表达规律,对其靶向调控关系及生物学功能进行初步验证和分析。进而选择其中的4个候选靶基因使用荧光素酶报告载体试验和巴什拜羊骨骼肌卫星细胞中的靶向调控试验最终确认其靶向调控关系。【结果】通过对两个cDNA文库高通量测序数据的分析,胎儿期和出生后分别获得了123个和118个miR-486的靶基因,因其靶向调控关系未经实验验证,故暂称为候选靶基因。其中有96个为两个阶段共表达的候选靶基因,其余27个和22个分别为胎儿期和出生后骨骼肌中特异表达的候选靶基因。GO和KEGG分析结果表明所得候选靶基因显著富集于与肌肉分化和肌纤维发育相关的代谢和信号转导通路,诸如PI3k-Akt、MAPK、Wnt、Adherens junction和Regulation of actin cytoskeleton等。qRT-PCR检测结果表明所选10个候选靶基因在不同发育阶段巴什拜羊骨骼肌中均有表达,但其表达变化规律有所不同。PTEN、Foxo1、Dock3、PAX7、IGF1R、PIK3I1和FBN1在胎儿期巴什拜羊骨骼肌中呈高表达,出生后其表达量显著下调,而OLFM4的表达量则呈相反的变化趋势,ARHGAP5和PDCD4在胎儿期和出生后巴什拜羊骨骼肌中的表达量未见显著变化。对其中4个候选靶基因的进一步试验验证,双荧光素酶报告载体试验结果表明,miR-486可以高效结合在其候选靶基因PTEN、Foxo1、IGF1R和PIK3R1的靶位点上,进而极显著抑制其后萤火虫荧光素酶的活性;巴什拜羊骨骼肌卫星细胞中的靶向调控试验结果亦表明miR-486可以显著下调上述4个候选靶基因的mRNA水平,抑制其生物学功能。所以可以确证在巴什拜羊骨骼肌中miR-486可以靶向调控PTEN、Foxo1、IGF1R和PIK3R1的表达。【结论】对巴什拜羊不同发育阶段骨骼肌中miR-486的靶基因进行了深入挖掘,全面解析了miR-486及其靶基因在巴什拜羊骨骼肌发育过程中参与的生物学过程和信号通路,所得候选靶基因数据可靠性高,可为阐明巴什拜羊优良肉质性状的分子调控机制奠定基础。
关键词： 巴什拜羊 miR-486 靶基因 骨骼肌 cDNA文库
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细粒棘球绦虫EGR-03347基因的原核表达及其对小鼠免疫效果的初步研究
《中国预防兽医学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：为了阐明细粒棘球绦虫3-羟基酰基-CoA脱氢酶基因（EGR-03347）生物学功能及其免疫原性,本研究通过分析已发表细粒棘球绦虫原头蚴高通量mRNA测序数据,从中筛选出细粒棘球绦虫脂肪酸代谢主要的调控基因之一—EGR-03347,将其克隆于原核表达载体pET-32a中,构建的重组质粒经诱导、纯化后通过SDS-PAGE及western blot检测。结果显示,重组EGR-03347蛋白（rEGR-03347）以包涵体的形式存在,分子量约47 ku;western blot结果显示,纯化的蛋白可与犬棘球蚴阳性血清特异性结合,具有较好的反应原性。将纯化的rEGR-03347与弗氏佐剂等体积混合并乳化后对小鼠经皮下多点注射（50μg/只）,共免疫4次,分别于首免后不同时间采血分离血清,经ELISA检测小鼠血清抗体水平;同时采用qPCR方法检测首免后不同时间小鼠脾细胞因子（IL-4、IL-10、TNF-α、IFN-γ）的转录水平。结果显示,随着免疫次数的增加,免疫组小鼠血清抗体水平逐渐升高,且在首免后56 d,即第4次免疫后抗体水平达到峰值,与对照组（PBS及佐剂组）相比差异极显著（p<0.01）。qPCR结果显示,rEGR-03347可诱导小鼠产生IFN-γ、IL-4和IL-10细胞因子,其中免疫后14 d～56 d rEGR-03347可致Th1型细胞因子IFN-γ的表达上调,免疫后56 d,可诱导Th 2型细胞因子IL-4和IL-10的表达上调,表明rEGR-03347可诱导小鼠产生Th1和Th2两种类型的免疫反应。综上,本研究首次初步证明细粒棘球绦虫EGR-03347具有作为诊断抗原及疫苗候选抗原的潜力,为后期其诊断方法及疫苗研发提供了参考依据。
关键词： 细粒棘球绦虫 3-羟基酰基-CoA脱氢酶 原核表达 蛋白纯化 细胞因子
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干旱胁迫下陆地棉光合叶绿素荧光参数与产量品质间的关联性分析
《分子植物育种 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：本研究在控制水肥条件下,以不同抗旱性的14份陆地棉为材料,通过测定现蕾期叶片的SPAD值、光合叶绿素荧光参数、吐絮期产量、分析光合叶绿素荧光参数与产量品质间的相关性,筛选出与抗旱性密切相关的指标。结果表明,陆地棉18k0205的蒸腾速率（Tr）、气孔导度（Gs）、光合速率（Pn）、光系统Ⅱ有效量子产量ΦPSII和田间产量均高于其他陆地棉材料,而18K0319的纤维长度和断裂比强度均高于其他材料,这两个材料可作为优异抗旱种质资源进行育种实践。14份材料的光合叶绿素荧光参数与产量品质间的相关性分析表明,净光合速率（Pn）与衣分呈显著负相关,水分利用效率（WUE）与纤维长度呈显著正相关,与马克隆值呈显著负相关。光系统Ⅱ的有效量子产量ΦPSII与衣分呈显著负相关。灰色关联度分析表明,产量与Fv/Fm、SPAD、单铃重紧密关联,关联系数0.85以上;纤维长度与WUE、Fv/Fm、Fm、SPAD紧密关联,关联系数0.90以上;衣分与SPAD、单铃重、Fv/Fm紧密关联,关联系数0.88以上;纤维断裂比强度与SPAD、qP、ΦPSII紧密关联,关联系数0.89以上;马克隆值与Fv/Fm、ΦPSII、Ci紧密关联,关联系数0.87以上。研究结果表明陆地棉产量及纤维品质性状与Fv/Fm、SPAD、单铃重、ΦPSII等重要性状紧密关联,上述研究结果为棉花抗旱种质资源筛选和鉴定提供一定的参考依据。
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