科研产出
SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR法检测朗德鹅填饲前后黑素皮质素受体-4基因(MC4R)的表达
《农业生物技术学报 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：黑素皮质素受体4基因(MC4R)在各组织中的不同表达对于鹅脂肪代谢具有重要作用。本研究应用强制填饲技术建立腹型肥胖朗德鹅(Casuarius casuarius)模型,提取填饲后及正常朗德鹅新鲜腹脂、肝脏等13种组织的总RNA,SYBRGreenⅠ荧光定量PCR法检测各组织MC4R基因的表达,选择β-actin作为内参基因,使用半定量2-ΔΔCt法分析。PCR结果显示,MC4R基因及β-actin在填饲前后朗德鹅心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、肌胃、小肠、胰腺、脑、胸肌、腿肌、腹脂、皮下脂等13种组织中均存在不同程度表达。SYBRGreenⅠ荧光定量PCR结果表明,在肾、小肠和心这3个组织中,填饲后朗德鹅MC4R表达量均比对照组中朗德鹅该基因表达量低,填饲后分别为填饲前表达量的0.41±1.80、0.65±5.75和0.72±1.22倍。而在其他组织中,MC4R基因表达量均有不同程度的增加,填饲组/对照组相对表达量倍数由高到低顺序分别为:22.78±1.00倍(脑),9.08±2.80倍(肝),5.28±1.83倍(肺),3.78±3.01倍(胰),3.07±3.64倍(腿肌),2.90±0.97倍(胃),2.34±1.66倍(皮下脂肪),2.18±3.01倍(腹脂),2.07±0.37倍(胸肌),2.01±1.75倍(脾)。结果符合MC4R作用机理,为畜牧生产及人类肥胖问题的研究提供间接依据。
关键词： 黑素皮质素受体4基因(MC4R) 脂肪代谢 鹅 实时荧光定量PCR 表达
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副猪嗜血杆菌不同分离株CDT基因序列测定及其遗传变异分析
《华北农学报 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：CDT毒素是多种革兰氏阴性致病菌的毒力因子。为了阐明CDT毒素在副猪嗜血杆菌不同菌株中的分布及其遗传变异情况,本试验对从浙江省不同地区猪场临床发病猪中分离到的41个副猪嗜血杆菌分离株进行了CDT基因PCR扩增,并对其中21个分离株CDT 3个亚基进行了基因测序及氨基酸序列分析。结果表明:所有41个临床分离株中都可以检测到CDT 3个亚基的基因,其中cdtA蛋白的氨基酸序列在不同副猪嗜血杆菌菌株中最为保守,同源性≥97.8%;cdtB及cdtC蛋白氨基酸序列变化较大,同源性均≥92.1%。其中cdtB亚基与牛DNase I活性关键位点的氨基酸残基具有一致性,且这些位点的氨基酸残基在不同菌株中高度保守,可能对CDT诱导细胞凋亡的活性起着重要作用。为研究副猪嗜血杆菌CDT的生物学作用提供了新的信息。
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稻粒黑粉菌冬孢子萌发影响因素及其产孢培养基的筛选
《浙江农业学报 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：稻粒黑粉病是由担子菌亚门齿黑粉菌属的稻粒黑粉菌引起的。试验设置不同的温度、湿度、光照时间、pH值等培养参数,观察这些不同的参数对稻粒黑粉菌冬孢子萌发的影响。结果表明,冬孢子在充分吸水、温度24～28℃、光照与黑暗间隔培养12 h、pH值为7左右的条件下,最适宜冬孢子萌发。试验还观察并描述了稻粒黑粉菌冬孢子的形态特征和萌发过程。此外,为了建立稻粒黑粉病人工接种体系及研究稻粒黑粉菌与水稻之间的互作,需要筛选到能够产生稻粒黑粉病的接种体——次生小孢子的培养基。试验还研究了麸皮培养基等7种液体培养基的产孢效果,结果发现麸皮培养基最适合稻粒黑粉菌产生次生小孢子.
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转盘斜刮式光电自动数粒仪设计
《农业机械学报 》 2011 EI 北大核心 CSCD
摘要：基于粒料在移行中可自动产生间距的转盘斜刮排序原理,设计了转盘斜刮式光电自动数粒仪和千粒重仪。无序的粒料或种粒进入有斜槽和弧槽的槽盘中,在底部转盘带动下实现移行、自动整齐排序和产生粒间距,获得光电计数所需的可靠透光间隙,并通过预置和复检二次计数实施数粒。试验表明:每轮预置计数误差数小于1～2颗,而复检计数与实际粒数的误差率小于0.04%;计数速度可达30～50粒/s;粒料适用范围为0.5～18 mm;未发现供试粒料破损现象;结构简单可靠,无电磁振动噪声等;转盘斜刮式排序原理还可用于开发高精度无粒料损伤的数粒设备。
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一个新的水稻半矮化小穗突变体的遗传分析与基因定位
《中国水稻科学 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：从粳稻中花11转基因后代中发现了一个半矮化小穗突变体,表现为植株半矮化、生长势弱、半包茎穗、穗型变小等特点,将其命名为sdsp2(semidwarfandsmallpanicle2)。遗传分析显示,该突变体表型受1对隐性核基因控制。以sdsp2突变体为母本与龙特甫B杂交构建F2分离群体,将该基因定位在水稻第6染色体的RH6-32和RH6-40之间的116kb的物理距离内。通过水稻基因组注释系统在此区域预测到14个开放阅读框,未发现与已报道穗型发育相关基因的同源基因。
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高效液相色谱法测定水稻穗部的GA_3含量
《浙江农业学报 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：以水稻穗部为材料,探索内源赤霉酸(Gibberellin A3,GA3)的提取和纯化方法,利用高效液相色谱法建立分析测定方法。针对水稻样品富含色素和多酚类等杂质的特点,用氯仿去除色素,然后采用三步萃取法纯化GA3。在以往用高效液相色谱法分析植物内源激素的研究基础上,试验对色谱条件进行了改进。研究发现,最优色谱条件包括紫外检测器在254 nm波长下进行检测,以乙腈—水—乙酸(体积比为20∶79∶1)溶液为流动相,流速为1.0 mL.min-1等条件下峰形良好且保留时间稳定。结果表明,按照本试验流程,样品的添标回收率在80%以上,且相对标准偏差小于3%,较高的回收率和精密度表明本试验流程可以准确地分析测定水稻穗部GA3。
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果子蔓凤梨Actin基因的克隆与序列分析
《分子植物育种 》 2011 CSCD
摘要：持家基因Actin常被用作定量、半定量PCR试验的内参,以确定目标基因的相对表达量。基于前期从全长cDNA文库中获得Actin基因的EST单克隆,进行Primer Walking测序,获得一个Actin基因的全长cDNA序列,序列长1625bp,ORF为1131bp,可编码377个蛋白氨基酸,命名为Goactin1(GenBank登录号:HQ184438)。蛋白质理论分子质量为41.7kD,等电点pI为5.31,包含一个Actin superfamily保守区,二级结构主要由随机卷曲、Alpha螺旋、延伸链和Beta转角组成。此外以2BTF A链为基础建立起了Goactin1蛋白的三级结构图。系统进化树分析表明Goactin1蛋白与马铃薯、棉花、烟草、短柄草、拟南芥等的Actin蛋白聚为一类,它们的亲缘关系最近。
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