科研产出
黑皮冬瓜NBS类抗病基因同源序列克隆与分析
《热带作物学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：以黑皮冬瓜"B98K"种质为试材,根据已克隆的植物NBS类抗病基因保守结构域设计简并引物,PCR扩增冬瓜基因组DNA,获得对应区段的DNA片段,回收克隆与测序后,得到19条抗病同源序列(命名为DNB1至DNB19)。利用DNAStar软件进行序列分析及同源性比对发现,这些抗病同源序列长度在249~252 nt之间,其核苷酸序列同源性在48.4%~98.8%之间,氨基酸序列同源性为23.2%~100.0%,推导氨基酸序列具有P-loop(GGVGKTT)、Kinase-2a(VLDDVW)典型的NBS保守结构域。同源进化分析将其全部归为non TIR-NBS-LRR类,与推导氨基酸序列多重比较结果一致;该序列与其他作物已克隆抗病基因的氨基酸序列同源性在24.7%~99.0%之间。该组序列已登录Genbank,登录号为KF776401~KF776419。
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饲粮核黄素水平对笼养蛋鸭产蛋性能、蛋品质、血液生化及抗氧化指标的影响
《动物营养学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：本试验旨在研究饲粮核黄素水平对笼养蛋鸭产蛋性能、蛋品质、血液生化及抗氧化指标的影响。试验选择504只健康、体重接近的福建龙岩山麻鸭随机分为7个组,每组6个重复,每个重复12只。各组核黄素添加水平分别为0(Ⅰ组)、3(Ⅱ组)、6(Ⅲ组)、9(Ⅳ组)、12(Ⅴ组)、15(Ⅵ组)、18 mg/kg(Ⅶ组)。试验期12周。结果表明:1)饲粮核黄素水平对蛋鸭产蛋性能无显著影响(P>0.05),但Ⅲ组产蛋率、平均蛋重、日产蛋重、料蛋比均最佳。2)Ⅲ组蛋白高度显著高于除Ⅱ组外的其他各组(P<0.05),哈氏单位显著高于Ⅰ、Ⅴ、Ⅵ组(P<0.05)。蛋黄色泽随饲粮核黄素水平的增加有升高的趋势(P=0.08)。3)饲粮核黄素水平显著影响血液T淋巴细胞增殖率(P<0.05)。随饲粮核黄素水平的升高,血浆核黄素含量先升高后下降,红细胞谷胱甘肽还原酶活性系数先下降后升高。4)饲粮核黄素水平显著影响血浆及肝脏中总超氧化物歧化酶活性及肝脏黄嘌呤氧化酶活性(P<0.05)。由此可见,饲粮核黄素水平为6 mg/kg时,蛋鸭可以获得较好的产蛋性能及蛋品质。饲粮核黄素水平的增加可显著提高蛋鸭机体抗氧化能力,添加水平不低于12 mg/kg时效果较好。
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利用二代测序技术高通量分析水稻品种间抗病性差异的分子基础
《西北植物学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：稻瘟病和白叶枯病是由稻温病菌(Magnaporthe oryzae)和白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae)引起的两种主要水稻病害,也是制约中国水稻生产的主要病害。为了从DNA水平探索造成水稻感病品种‘丽江新团黑谷’(LTH)和高抗品种‘特特普’(Tetep,TTP)间抗病性差异的分子基础,该研究对其已知的3个抗稻瘟病基因和3个抗白叶枯基因所在DNA区段分别进行PCR扩增,将等量混合的PCR产物再与基因组重测序样品按Ct值差值(ΔCt)~10的比例混合,采用二代测序技术进行一次性测序和比较分析,并对有差异的基因区域进行常规传统测序验证,以确定这2个品种中抗性基因(R基因)的数目和结构与品种抗病或感病表型的关联性。实验结果表明,二代测序能够快速并准确地寻找到2个不同水稻品种中多个特定基因的序列差异,且差异位点与常规测序结果相符。从LTH和TTP这2种抗性不同水稻品种在多个抗性基因的DNA水平差异来看,有差异的抗性基因位点在高抗品种TTP中大都与原始抗性基因序列相同,而对应的普感品种LTH的抗性基因往往多表现为氨基酸突变,这些序列差异很可能就是导致TTP与LTH抗性差异的分子基础。
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肺炎克雷伯氏菌S001草甘膦靶标酶基因的克隆及其抗性验证
《中国农业科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】由于草甘膦在农业生产中的广泛使用,抗草甘膦转基因作物的研究一直是转基因作物研究的热点,其中草甘膦抗性功能新基因的挖掘是核心问题。自然界中微生物种类繁多,基因资源丰富,论文拟从广东地区农田土壤中筛选和鉴定出高抗草甘膦菌株,克隆其草甘膦靶标酶基因并进行抗性水平验证,以期获得高抗草甘膦新基因资源用于抗草甘膦转基因作物的研究。【方法】用含有浓度梯度草甘膦的选择培养基从备选土壤中筛选出具有高抗草甘膦特性的菌株;通过显微观察、革兰氏染色以及16S rDNA序列分析结果对菌株种类进行鉴定;利用RT-PCR技术克隆该菌株的草甘膦靶标酶基因aroAS001,并通过序列比对和系统发育树分析aroAS001序列的基本特征;利用重叠PCR法对aroAS001变异位点进行定点突变获得aroAS001-mut序列后,将aroAS001和aroAS001-mut基因片段转入aroA基因缺陷型菌株DH5α/△aroA中进行基因功能互补和草甘膦抗性水平验证。【结果】分离出一株高抗草甘膦菌株,经形态学和分子生物学鉴定该菌株为肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae),命名为kpS001;克隆该菌株草甘膦靶标酶5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSPS)基因aroAS001,序列分析结果显示由该基因所编码的氨基酸序列具有典型的Class I EPSPS特征,但与已报道肺炎克雷伯氏菌的aroA相比其第227位碱基发生突变,致使对应的氨基酸发生变异。对该基因差异位点进行核酸定点突变获得aroAS001-mut基因片段后,将aroAS001和aroAS001-mut基因片段分别转入缺陷型大肠杆菌菌株DH5α/△aroA进行功能互补验证,与对照菌株相比,转入aroAS001和aroAS001-mut的重组菌株均能在含200 mmol·L-1以下浓度草甘膦的培养基中能够正常生长,表现出良好的抗性,之后随着草甘膦浓度增加其生长状态开始受到抑制,当草甘膦浓度达到350 mmol·L-1时,菌株生长基本完全被抑制。【结论】肺炎克雷伯氏菌kpS001菌株是一株高抗草甘膦菌株,由aroAS001编码的草甘膦靶标酶EPSPS属于Class I EPSP合成酶,aroAS001对草甘膦具有优良抗性,能在含350 mmol·L-1以下浓度草甘膦的培养基中生长,该基因可以作为备选基因资源用于抗草甘膦转基因作物的研究。
关键词： 肺炎克雷伯氏菌 5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSPS) aroAS001 草甘膦抗性
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冬春季低温期大棚茶园覆盖转光膜的综合效应
《广东农业科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：以露天茶园、普通膜大棚茶园为对照,研究了冬春季低温期大棚茶园覆盖转光膜并配合补充CO2气体的生理生态效应。结果表明,转光膜的保温、增湿效果稍优于普通膜。覆膜期间,1~3月棚内平均气温比露天茶园分别提高2.8~3.4℃、3.1~3.9℃、1.3~1.9℃,平均湿度比露天茶园高5.0~10.4个百分点,保温增湿作用显著。覆膜大棚的光照强度较露天茶园降低7.9%~30.2%,转光膜的透光率比普通膜略低,但转光膜大棚内茶树净光合速率、气孔导度、蒸腾速率显著高于普通膜大棚,略低于露天茶园。转光膜大棚内,茶树新梢萌动期、春茶开采期比普通膜大棚提前6~7d,比露天茶园提前23~27 d;转光膜大棚茶园明前茶产量比露天茶园高51.2%~56.2%,覆盖转光膜并补充CO2使春茶总产量比露天茶园增加33.3%,克服了以往单纯覆盖农膜导致春茶产量下降的缺陷;冬春季低温期覆膜对全年茶叶产量无不利影响。茶园覆盖转光膜有利于碳同化作用,水浸出物、茶多酚、可溶性糖含量增加,可促进茶汤的浓厚度、甜度。茶园覆盖转光膜后,棚内小气候变化对假眼小绿叶蝉、茶蚜繁殖有一定的抑制作用。
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四种常用三唑类杀菌剂在香蕉上残留行为及使用评价研究
《植物保护 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：采用田间试验研究了戊唑醇、氟环唑、苯醚甲环唑、丙环唑等4种常用三唑类杀菌剂在香蕉上的残留行为,并比较了戊唑醇在套袋与不套袋情况下的最终残留量。研究结果表明:香蕉上戊唑醇、氟环唑、苯醚甲环唑、丙环唑的降解半衰期分别为10.8~14.1、8.1~9.5、7.9~12.9、9.4~15.6d。在试验剂量条件下,末次施药后42d时,戊唑醇(不套袋)、戊唑醇(套袋)、氟环唑、苯醚甲环唑、丙环唑在蕉肉中的残留量分别为:0.01~0.04、<0.01、0.01~0.08、≤0.01mg/kg和0.02~0.07mg/kg;在全蕉上的残留量分别为0.05~0.47、<0.01、0.10~0.36、0.03~0.19mg/kg和0.05~0.32mg/kg。香蕉果肉占全果的比例约为55%~75%,全果的残留量约为果肉2~19倍,表明香蕉中戊唑醇、氟环唑、苯醚甲环唑、丙环唑主要残存在果皮上。戊唑醇防治香蕉叶斑病,在套袋情况下可以显著地减少其在收获期香蕉上的残留。
关键词： 戊唑醇 氟环唑 苯醚甲环唑 丙环唑 香蕉 残留行为
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稻曲病菌培养特性及致病力研究
《广东农业科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：采用固体、液体培养及温室人工接种方法,测定了来自5个省(市)的10个稻曲病菌株的产孢特性、固体、液体培养特性及对品种的致病力,并用3个菌株对12个水稻品种进行致病性比较。结果表明:稻曲病菌不同菌株间存在明显致病性差异,不同品种对不同菌株的抗感反应也表现出显著差异。供试菌株的固体培养形态可分为7种类型,菌株的产孢特性、固体培养形态与致病力有一定的相关性,而振荡菌液颜色、产菌丝量与致病力相关性不明显;验证了火焰灼烧表面组织分离法及分生孢子液划线稀释法的单孢分离技术和控温控湿条件下菌丝-孢子混合接种体孕穗期注射接种法,该方法分离成功率及接种病穗率均可达100%,适用于水稻对稻曲病的抗性鉴定及相关研究。
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