科研产出
超甜玉米闽双色6号籽粒甜度遗传基础解析
《福建农业学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：【目的】本研究深入探究甜玉米甜度形成的关键基因及可能涉及到的杂种优势分子机制。【方法】以超甜玉米品种闽双色6号及其双亲为研究材料，利用生物信息学，重测序，转录组等技术对蔗糖合酶基因家族进化、甜度相关基因分型及表达模式进行分析。【结果】玉米中存在18个蔗糖合酶基因；其中，Zm0001d029087与Sh1、Sus1和Sus2/3同属一个亚家族，进化上亲缘关系较近，表明Zm0001d029087可能在籽粒糖代谢中发挥功能；在双亲与B73的变异分析中发现，Sh1、Sus1和Sus2/3均存在突变，共同构成闽双色6号的超甜特性的遗传物质基础；表达分析发现，18个基因中仅Zm0001d029087与Sh1、Sus1和Sus2/3在籽粒中有表达。进一步对4个基因在闽双色6号及其双亲中的表达进行分析，结果显示，除Sh1基因外，其他3个基因在闽双色6号中的表达显著低于双亲或之一，表明闽双色6号在糖代谢途径上存在超亲遗传的分子机制。【结论】解析了闽双色6号籽粒超甜特性的遗传特性，发现1个潜在的功能基因Zm0001d029087，并初步探究杂种优势在闽双色6号超甜特性形成中的遗传机制。
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鸭腺病毒B血清1型和血清2型双重PCR检测方法的建立及应用
《中国预防兽医学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：番鸭白肝病是2014年以来我国番鸭流行的一种新疫病,其病原为一种与鸭腺病毒B型法国GR株同源性较高的新型腺病毒,暂命名为鸭腺病毒B血清2型(DAdV-B2),将法国GR株命名为鸭腺病毒B血清1型(DAdV-B1).为建立同时检测DAdV-B1和DAdV-B2的方法,本研 究根据GenBank中DAdV-B1 fiber基因和DAdV-B2fiber1基因序列特征,分别设计了 2对特异性引物,通过优化反应条件,建立了可以同时检测这两种病毒的双重PCR方法.结果显示:优化后的PCR方法最佳退火温度为60.1℃,最适引物浓度为0.16 μmol/L;利用该方法对DAdV-B1、DAdV-B2、鸭腺病毒A型(DAdV-A)、禽腺病毒血清4型(FAdV-4)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV)、新型呼肠孤病毒(NDRV)、番鸭源鹅细小病毒(MDGPV)、番鸭细小病毒(MDPV)和禽坦布苏病毒(ATUMV)等检测,结果显示,该方法仅对DAdV-B1和DAdV-B2有特异性扩增,对其他鸭临床常见病原均无扩增,特异性较强.将DAdV-B1 fiber和DAdV-B2 fiber1质粒标准品等体积混合并作10倍倍比稀释后作为模板,利用该双重PCR方法检测,结果显示,该方法对DAdV-B1fiber和DAdV-B2fiber1质粒标准品的最低检测限分别为175拷贝/μL和163拷贝/μ.L,对DAdV-B2的最低检出滴度为1×101TCID50,敏感性较高.批内和批间的重复性试验检测结果均一致,重复性好.利用该双重PCR与单一PCR方法同时对64份临床样品检测,结果显示二者的符合率为100%,其中DAdV-B2的阳性率为79.7%(51/64),DAdV-B1的阳性率为4.7%(3/64).以上结果表明本研究建立的双重PCR方法特异性较强、敏感性较高和稳定性较好,为DAdV-B1和DAdV-B2的临床鉴别检测及其分子流行病学调查提供了技术手段.
关键词： 鸭腺病毒B血清1型 鸭腺病毒B血清2型 fiber基因 fiber1基因 双重PCR
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酿酒酵母菌剂等温干燥曲线及其存活率干燥动力学
《福建农业学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：【目的】为高活力酿酒酵母直投式发酵剂的研发提供理论和技术支持。【方法】以酿酒酵母JH301为研究对象，采用沸腾炉热风干燥技术制备菌剂，研究不同温度下酿酒酵母沸腾炉热风干燥过程水分含量、菌存活率的变化及其相关性，建立酿酒酵母菌剂等温干燥曲线及其存活率干燥动力学模型，并采用核磁共振技术考察酵母菌沸腾炉热风干燥过程水分迁移分布规律。【结果】（1）酿酒酵母菌剂沸腾炉热风干燥过程等温干燥曲线符合Henderson指数函数模型M=a×EXP（b×T）,a、b均为与干燥温度W相关的常数。（2）随着干燥过程菌剂水分含量的下降，菌存活率呈先平缓下降后快速下降趋势，存在菌存活率拐点水分阈值。在拐点水分阈值前后，菌存活率干燥动力学模型分别符合模型y前=a前x+b前、y后=a后x+b后，a、b均为与温度（W）相关的常数。y前与y后的交叉点即为菌存活率拐点水分阈值，菌存活率拐点水分阈值与干燥温度呈正相关，菌存活率与细胞结合水的逃逸速率呈负相关。（3）菌存活率拐点水分阈值的最低干燥温度理论值为41.2℃。通过对模型参数预测与验证，适宜的干燥温度为42℃，时间为20 min，菌剂水分含量为（5.24±0.12）%，菌存活率可达（48.24±0.15）%。【结论】通过调控热风干燥过程酿酒酵母结合水的逃逸速率，可提高菌存活率。
关键词： 酿酒酵母菌剂 菌存活率 水分阈值 沸腾炉热风干燥 水分分布
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豆大蓟马消化道形态及超微结构
《昆虫学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：[目的]本研究旨在明确豆大蓟马Megalurothrips usitatus各个发育阶段消化道形态和超微结构.[方法]运用激光共聚焦显微镜和透射电子显微镜技术观察豆大蓟马若虫、预蛹、蛹和成虫期消化道形态和超微结构.[结果]豆大蓟马消化道由前肠、中肠、后肠及马氏管组成.1龄若虫、2龄若虫、预蛹、蛹、雌成虫和雄成虫的消化道平均长度分别为1 642.65±158.68,2 233.68±133.76,1 264.39±92.43,1 169.81±59.48,2 380.32±196.67和 1 344.31±143.29 μm.前肠分为咽、食道、嗉囊和贲门4个部分,肠壁由外向内分别为肌上皮细胞外层、肌肉层、上皮细胞层和角质层.1和2龄若虫前肠有大量囊泡,角质层不明显.预蛹、蛹和成虫前肠细胞角质层较厚,肌肉也较发达.中肠分为前中肠、中中肠和后中肠3个部分,由外向内分别为肌细胞层和上皮细胞层,靠近肠腔的一侧特化成微绒毛结构.1龄若虫前中肠细胞含有储备物质;2龄若虫前中肠细胞含有髓鞘样结构以及较多的类自噬泡结构;预蛹和蛹中肠细胞含有球晶;成虫前中肠和中中肠细胞含有基底迷路.后肠由回肠和直肠2部分组成,各个发育阶段均具有发达的肌肉层和角质层.马氏管没有肌肉层,上皮细胞包含线粒体、粗面内质网、基底迷路、紧密连接等细胞器或结构.预蛹和蛹的马氏管基部未观察到基底迷路结构,但预蛹马氏管细胞内分布有多泡体.此外,蛹期马氏管细胞质中观察到球晶.[结论]豆大蓟马各个发育阶段的消化道形态结构有明显差异.本研究根据消化道不同部位的形态组成,对其功能进行了推测.研究结果将为进一步解析蓟马类昆虫消化道形态和功能分化提供实验依据.
关键词： 豆大蓟马;生长发育;消化道;比较形态学;透射电子显微镜
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鸭骨形态发生蛋白SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法的建立
《福建农业学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：【目的】旨在建立一种检测鸭骨形态发生蛋白（BMPs）mRNA转录水平的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RTPCR检测方法。【方法】根据GenBank中BMP1、BMP2、BMP3、BMP4、BMP5、BMP6、BMP7、BMP8a、BMP10和BMP15的核苷酸序列设计并合成特异性引物进行PCR扩增，产物回收后克隆至pMD-18-T载体，构建阳性重组质粒作为标准品，优化SYBR GreenⅠ荧光定量PCR反应条件，建立其标准曲线，对建立的方法进行特异性、敏感性和重复性试验。【结果】建立的BMP1、BMP2、BMP3、BMP4、BMP5、BMP6、BMP7、BMP8a、BMP10和BMP15基因实时荧光定量检测方法特异性强，无引物二聚体及非特异性产物，熔解曲线为单峰，相关系数R2均大于0.998，组间和组内变异系数均小于1%。应用该方法检测BMPs基因在半番鸭组织中的表达水平，结果显示，BMP1、 BMP2、 BMP5和BMP7基因在心脏中表达量较高，分别为5.5×10~4、 1.1×10~5、 5.1×10~5和7.7×10~5拷贝·μL-1; BMP6和BMP10基因在肝脏中表达量较高，分别为7.5×10~4和7.6×10~3拷贝·μL-1；而BMP3、 BMP4、BMP8a和BMP15分别在法氏囊、胸腺、喙和脾脏中表达量最高，分别为1.5×10~5、2.1×10~4、1.8×10~3和3.3×10~3拷贝·μL-1。【结论】本研究建立的实时荧光定量PCR方法特异性强、重复性好，为检测鸭BMPs表达水平提供了技术手段。
关键词： 鸭 骨形态发生蛋白（BMPs） 荧光定量PCR SYBR GreenⅠ
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种植模式和坡位对茶园土壤细菌群落结构及功能类群的影响
《生态学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：茶树（Camellia sinensis L．）种植是亚热带丘陵山区主要的土地利用类型，茶园种植模式是影响土壤细菌群落结构的主要人为因素。为揭示种植模式和坡位对土壤细菌群落结构和功能的影响，选取两种不同种植模式（常规和有机种植模式）和3个坡位（上、中、下坡位）表层土壤（0—20cm）为对象，采用野外调查、Illumina Miseq高通量测序和PICRUSt2功能预测相结合的研究方法，研究不同种植模式和坡位下土壤细菌群落结构和功能特征，阐明土壤理化性质对土壤细菌群落结构的影响，预测土壤细菌功能特征。研究结果表明：（1）与常规种植模式相比，有机种植模式茶园土壤细菌Alpha多样性有所降低，其中中坡位常规茶园土壤细菌Sobs和Simpson指数显著高于有机茶园（P<0.05）；从坡面尺度看，两种种植模式下土壤细菌Alpha多样性指标均以中坡位最高，其中常规茶园中坡位土壤细菌Ace和Simpson指数均显著高于下坡位（P<0.05）。（2）各样地茶园土壤细菌共获得29个门82个纲190个目316个科517个属929个种，主要细菌优势门为绿弯菌门（Chloroflexi）、放线菌门（Actinobacterita）、变形菌门（Proteobacteria）、酸杆菌门（Acidobacteria）。土壤细菌群落优势属以AD3、热酸菌属（Acidothermus）、norank＿f＿＿norank＿o＿＿Elsterales和norank＿f＿＿Xanthobacteraceae为主。（3）主坐标分析（PCoA）显示，不同种植模式的茶园土壤细菌群落结构存在明显差异，常规种植模式下不同坡位之间的土壤细菌群落结构有显著差异（P<0.05），有机种植下不同坡位之间的土壤细菌群落结构无显著差异。置换多元方差分析（PERMANOVA）结果表明不同种植模式的土壤细菌群落结构差异显著（P<0.05），而不同坡位土壤细菌群落结构无显著差异（P>0.05），说明种植模式对茶园土壤细菌群落结构的影响更大。组间群落差异分析（LEfSe）表明，57个差异物种对种植模式非常敏感，不同种植模式富集了不同的细菌类群。（4） PICRUSt2功能预测共获得6个一级功能层和46个二级功能层，表现出功能上的丰富性，土壤细菌群落在代谢、遗传信息处理和环境信息方面功能活跃。有机种植模式提高了土壤细菌碳水化合物代谢、氨基酸代谢、膜运输、信号转导、脂质代谢及外源生物降解与代谢功能。（5）相关分析和冗余分析结果表明，土壤碱解氮、速效磷、全磷、全钾和pH是影响土壤细菌群落丰度和多样性的主要影响因子。总体而言，有机种植模式改变了茶园土壤细菌群落结构和代谢功能，增加土壤有益细菌的数量，有利于保持茶园土壤可持续的生态环境。
关键词： 有机茶园 坡位 细菌群落组成 高通量测序 PICRUSt2功能预测
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福建典型白茶产区茶园土壤锰锌形态特征及其影响因素
《生态环境学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：为探讨福建白茶产区茶园土壤锰锌形态特征及对茶叶的有效性,在典型白茶产地—福鼎市采集8个剖面(0—100 cm)土壤样品、32个耕作层(0—20 cm)及相应鲜叶(一芽二叶),分析土壤中锰锌含量、赋存形态、剖面分布规律及影响因素.结果表明:福鼎市茶园耕作层土壤全锰和全锌含量均值分别为394.84 mg·kg?1和101.58 mg·kg?1,高于福建省土壤背景值;土壤有效锰锌含量均值分别为49.41 mg·kg?1和3.34 mg·kg?1,28.13%比例的茶园土壤缺锰,34.38%的茶园低于高产茶园标准.茶园土壤锰形态分布规律表现为残渣态>铁锰氧化物结合态>有机结合态>离子交换态>碳酸盐结合态,土壤锌形态分布规律表现为残渣态>离子交换态>铁锰氧化物结合态>碳酸盐结合态>有机结合态.茶园土壤各形态锰含量剖面分布总体表现为由上至下递增趋势,离子交换态锌和有机结合态锌由上至下总体呈现出微弱的递减趋势,其他形态在剖面中分布规律不明显.茶园土壤锰锌形态总体受土壤pH、有机质和全氮的影响,离子交换态锰和碳酸盐结合态锰与土壤速效钾呈显著或极显著正相关,碳酸盐结合态锌与速效钾呈显著负相关,离子交换态锌与土壤阳离子交换量呈极显著正相关,土壤锰锌各形态与土壤速效磷之间相关性均不显著.茶叶锰平均含量为664.46 mg·kg?1,锌平均含量为45.03 mg·kg?1.茶叶中锰含量与土壤全锰、离子交换态锰和铁锰氧化物结合态锰之间呈显著正相关,茶叶咖啡碱含量也与这4种形态锰含量呈显著正相关.茶叶中锌含量与土壤全锌含量之间呈显著正相关,茶鲜叶酚氨比与土壤有机结合态锌之间呈显著负相关.总体而言,福鼎市部分茶园土壤缺锰现象,茶叶中咖啡碱含量与土壤锰形态之间关系密切,该区茶叶生产需根据茶园地形、管理措施和土壤养分等条件合理施肥,建议部分茶园增施锰(锌)肥和间作绿肥以提高茶叶品质.
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淮山粉对木糖醇戚风蛋糕品质的影响
《食品与机械 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：目的:探究淮山粉添加量对木糖醇戚风蛋糕质构和品质的影响。方法:在制备木糖醇淮山戚风蛋糕过程中，以蛋糕比容、面糊相对密度、水分含量、色泽、质构等为评价指标，考察淮山粉添加量（10%,20%,30%,40%,50%）对蛋糕品质的影响。结果:随着淮山粉添加量的增加，蛋糕比容下降，面糊相对密度、水分含量增大；硬度、咀嚼性和胶着性先增加后减小，弹性、回复性和内聚性先减小后增大；L*值（亮度）减小、a*（红色）先增大后减小、b*（黄色）下降、△E（总色泽）差异增大。结论:淮山粉的最适添加量为10%。
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油柰PsWRKY33基因启动子的克隆与表达分析
《福建农业学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：[目的]探讨油柰(Prunus salicina lindley)WRKY33启动子在不同胁迫处理下的表达模式,为进一步深入研究油柰WRKY基因在油柰生长发育或抵御各种逆境胁迫中的作用机制等提供理论依据.[方法]利用MEGA 6.06软件构建PsWRKY33的系统进化树.通过染色体步移技术克隆获得该基因启动子序列,利用PlantCARE数据库分析预测PsWRKY335′端上游启动子区域的顺式作用元件.利用拟南芥浸花法获得转基因植株.通过对不同胁迫处理下的各片段转基因幼苗进行组织化学染色和GUS酶活性测定.[结果]系统进化树分析表明PsWRKY蛋白与拟南芥WRKY33亲缘关系最近,故将该基因命名为PsWRKY33.获得PsWRKY33基因5′端上游启动子序列长度为1872 bp,经预测分析发现该启动子区域含有ABRE、ARE、LTR、MYB和W-box等响应不同植物激素等顺式作用元件,基于此构建3个不同长度的缺失片段.对转基因植株不同组织GUS染色发现PsWRKY33启动子主要表达在叶、花瓣和花序梗上,且随着片段的缺失其表达越低.在不同胁迫处理下,其GUS活性表达程度不同.在低温胁迫条件下,不同长度的PsWRKY33启动子片段均受到不同程度的诱导上调表达;而在SA胁迫下,各片段呈现出不同程度的诱导下调表达.[结论]PsWRKY33基因启动子可能参与调节油柰应答低温胁迫及外源激素SA的响应.
关键词： 油柰;PsWRKY33;启动子;组织化学染色;胁迫
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羊口疮病毒115基因的克隆及原核表达
《福建农业学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：[目的]获得羊口疮病毒(ORFV)115基因表达蛋白.[方法]利用Oligo 7软件设计并筛选出115基因特异性扩增引物,以ORFV FJ-ND株基因组为模板,通过PCR技术扩增获得其基因序列,再将115基因克隆至pGEX-6p-1上,重组质粒pGEX-6p-115,并对其进行测序鉴定,鉴定正确后转化RosettaganmiB(DE3)感受态细胞,通过优化IPTG浓度和诱导时间获得重组融合蛋白最佳表达条件,用SDS-PAGE对表达的目的蛋白进行分析.[结果]115基因全长450 bp,编码149个氨基酸;115基因可以在RosettaganmiB中表达,重组蛋白分子大小约42 kDa,主要以包涵体形式表达.[结论]成功克隆了ORFV 115基因,构建了pGEX-6P-115原核表达质粒,优化了重组蛋白表达条件并进行纯化,为进一步探索ORFV 115蛋白在感染宿主过程中的机制和作用奠定基础.
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