科研产出
猪鼻支原体TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法的建立
《中国预防兽医学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：为建立快速检测猪鼻支原体(M.hyorhinis)的荧光定量PCR方法,本研究根据GenBank中登录的p37基因序列设计并合成引物及MGB探针,构建含有p37基因的重组质粒,以其为标准品绘制标准曲线,并检测该方法的特异性、敏感性和重复性。结果显示该方法具有良好的特异性,与猪肺炎支原体、猪絮状支原体、猪滑液支原体、鸡毒支原体、副猪嗜血杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、猪圆环病毒、猪瘟病毒及猪流感病毒无交叉反应,对M.hyorhinis的检测敏感性为10拷贝/μL,并且稳定性好,变异系数小于2%。利用建立的荧光定量PCR方法对55份临床样品进行检测,阳性检出率为87.3%(48/55),而分离培养方法和普通PCR的阳性检出率分别为41.8%(23/55)和29.1%(16/55)。该结果表明,建立的方法特异性强、敏感性高、稳定性好,可以用于M.hyorhinis临床样品的检测,对M.hyorhinis的快速和定量检测具有重要意义。
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橘红肉甘薯块根类胡萝卜素的变化规律及其与主要经济性状的相关性
《中国农业科学 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：【目的】研究橘红肉甘薯块根鲜薯类胡萝卜素含量在生育过程中和品种间的变化规律及其与主要经济性状的相关性。【方法】试验于栽插后50、64、78、92、106、120和134 d调查15个橘红肉甘薯品种的最长蔓长,分枝数,结薯数,茎、叶、柄、块根干率,茎、叶、柄、块根鲜重,测定鲜薯类胡萝卜素含量,薯干淀粉、可溶性糖和粗蛋白含量,分析茎、叶、柄、块根干重,整株鲜重、干重,茎、叶、柄、块根干重占整株干重的百分比等数值,以及类胡萝卜素积累量与其余产量性状的变化和品质性状积累量日增长量的相关性。【结果】橘红肉甘薯块根类胡萝卜素含量在生长发育过程中出现总体平稳型、一直增加型和曲折上升型3种变化类型,对最长蔓长、块根鲜重、块根干重、光合产物的分配等经济性状的发育有不同的生物学响应。大多数橘红肉甘薯,尤其是一直增加型品种,其类胡萝卜素含量与最长蔓长、块根鲜重和干重、光合产物在块根的分配比例显著正相关,与光合产物在叶、柄的分配比例显著负相关,而与其它性状的相关性不高。类胡萝卜素日积累量增长量与块根鲜重、块根干重、淀粉、可溶性糖和粗蛋白积累量等日增长量呈正相关性,类胡萝卜素积累与块根膨大、干物质及营养物质积累存在协同关系。【结论】由于类胡萝卜素积累与干物质积累存在的协同关系在不同品种中的反应机制不同,类胡萝卜素含量在橘红肉品种间产生差异和分化,存在3种不同变化类型。
关键词： 橘红肉甘薯 类胡萝卜素 变化类型 经济性状 相关性
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稻曲病菌T-DNA插入突变体5062的插入位点分析
《中国农业科学 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：[目的]研究稻曲病菌致病力增强的ATMT突变菌株5062,为稻曲病菌致病机制解析、致病相关基因克隆提供方法基础.[方法]测定和观察5062的菌落直径、菌落形态、产孢能力等生物学特性,进一步利用TAIL-PCR和RACE技术克隆5062基因组的T-DNA侧翼基因,并比对分析基因的信息,最后利用RT-PCR检测突变基因的表达量.[结果]与野生型菌株相比,突变菌株5062田间接种表现为致病力增强,在MM和水琼脂培养基上生长速率减慢,产生大量分生孢子,而在PSA和TB3培养基上,其菌落形态、色素等方面与野生型无明显差异.TAIL-PCR扩增得到的紧邻T-DNA两侧的侧翼序列在野生型中不相邻.TAIL-PCR结合RACE技术克隆了5062基因组的T-DNA侧翼基因,RT-PCR表明T-DNA插入位点右侧1个基因在突变体中上调表达.[结论]突变菌株5062的致病力增强,在营养贫乏条件下产孢能力增强,其表型的变化可能是染色体重排和T-DNA插入共同影响的结果.
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滨海滩涂盐碱地甜高粱生长和地上部干物质积累特性的研究
《中国农学通报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：明确不同密肥水平下滨海滩涂盐碱地甜高粱生长特性、干物质积累特征,为盐碱地甜高粱高产栽培提供理论基础。以甜高粱ST008为试验材料,采用二因素随机区组设计,研究不同种植密度及氮肥用量水平对盐碱地甜高粱农艺性状、产量及茎秆糖锤度的影响;利用通径分析,对甜高粱不同生育阶段干物质积累与生物产量、糖锤度之间的相互关系进行了相关性分析。甜高粱ST008在种植密度120000株/hm2、氮肥用量300kg/hm2条件下获得的生物产量、籽粒产量和茎秆含糖量较高,株高、叶片数、茎粗等较为适宜。通径分析表明,拔节至抽穗期地上部干物积累量和生物产量、茎秆含糖锤度之间呈极显著的正相关关系,对提高生物产量、茎秆糖锤度的贡献最大。盐碱地甜高粱在密度120000株/hm2、施氮量300kg/hm2水平下生物产量最高。提高拔节至抽穗阶段甜高粱植株的光合生产是提高甜高粱产量、含糖量的关键。
关键词： 甜高粱 种植密度 施氮量 生长特征 地上部干物质积累
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结球甘蓝遗传多样性的SSR分析
《江苏农业学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：利用62对SSR引物对36个结球甘蓝种质材料进行了遗传多样性分析.结果表明,有40对SSR引物在36个种质材料间表现为多态性.共检测到146个等位基因位点,每对引物的等位基因位点变幅为2-7个,平均为3.65个,有效等位基因数为127.88个,平均为3.20个.每个SSR位点的多态信息量(PIC)变化范围为0.182-0.832,平均为0.644.36个种质材料问遗传相似系数变幅为0.473~0.815,平均为0.720.UPGMA聚类分析结果显示,在相似系数为0.62的水平上可将36个甘蓝种质材料聚为三大类群,利用SSR分子标记可以从DNA水平上进行结球甘蓝遗传多样性分析.
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生防菌Bs916合成脂肽抗生素泛革素的操纵子结构功能及生物活性
《中国农业科学 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：【目的】明确枯草芽胞杆菌Bs916(Bacillus subtilis 916)分泌的脂肽化合物Fengycin操纵子的结构、功能和生物活性,阐明枯草芽孢杆菌Bs916防治真菌病害的分子作用机制。【方法】在Bs916全基因组测序基础上,采用LA-PCR方法克隆Fengycin的操纵子Fen;通过生物信息学方法分析Fen操纵子的遗传特征;运用基质辅助解离质谱法测定Fen操纵子合成的脂肽类化合物中同系物的分子量;采用同源重组方法构建Fengycin突变株BSFG;通过抑菌活性和溶血活性试验测定突变株BSFG的生物活性。【结果】克隆到Bs916基因组DNA中全长约37.67 kb的Fen操纵子,含有5个开放阅读框架分别编码FenA、FenB、FenC、FenD和FenE多功能复合酶;与Bs168对应Fen操纵子的同源性为65%。根据该操纵子特征推测其编码的脂肽类化合物为Fengycin;Fen操纵子负责合成的Fengycin包含5个变异体,分属于两类不同同系物。同系物1的质子化峰分子量分别为1 449.8、1 463.9、1 477.9;属于相差1个(-CH2)亚甲基的同系物,一级结构为[cyclo-([cyclo-(Glu-Orn-Tyr-Thr-Glu-Ala-Pro-GlnTyr-β-amino fatty acid)];同系物2的质子化峰分子量分别为1 491.9和1 505.9,也属于相差1个(-CH2)亚甲基的同系物,相对于同系物1其第6位的Ala氨酸残基变为Val氨酸残基。生物活性测定结果表明突变株BSFG抗菌活性相对于野生型菌株Bs916得到显著下降,但溶血活性的变化不明显。【结论】本研究克隆了生防菌Bs916中合成Fengycin的完整操纵子,通过对操纵子生物信息学分析和生化试验鉴定了Fengycin的5种变异体的化学结构,并阐明了脂肽Fengycin是Bs916抗真菌活性的重要因子之一。
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甘蓝型油菜丙酮酸激酶基因RNA 干扰载体的构建
《江苏农业学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：采用基因芯片技术,从油菜中鉴定了一个油分积累优势表达基因即丙酮酸激酶(Pyruvate kinase, PK)基因.为构建甘蓝型油菜PK 基因的RNA 干扰(RNAi)载体,通过设计引物克隆了PK 基因长498 bp 的siRNA 靶序列,连接到pEASY鄄T1 载体上,采用Not I 和Xho I 酶切,酶切产物连接到RNAi 平台载体pHurricane 的Not I 和Xho I 位点,通过多重PCR 鉴定证实载体构建成功,然后将上述PK 基因反向重复框克隆到加入napin 启动子的pCAMBIA1390 表达载体相应的酶切位点上,构建具有种子特异性表达的PK 基因的RNAi 载体.限制性内切酶酶切证实载体构建成功,为进一步研究PK 基因参与决定油菜油分积累的分子机理和代谢调控奠定了基础.
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茶树根系内生真菌与根际土壤真菌的季节多样性分析
《南京农业大学学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：从不同季节的茶树根系和根际土壤中分离得到真菌2 019株,包括茶树根系内生真菌826株、根际土壤真菌1 193株。采用分子生物学鉴定方法,对rDNA-ITS区段进行扩增及分析,共鉴定出13个属28种真菌,其中茶树根系内生真菌12种,根际土壤真菌20种。对不同季节分离得到的真菌进行多样性分析,结果表明:春、夏、秋季分离出茶树根系内生真菌种类分别为12、11、12;3个季节Shannon-Wiener多样性指数差异不明显;而均匀度指数夏季最高,秋季次之,春季最低。春、夏、秋季分离出根际土壤真菌种类分别为18、17、20;3个季节Shannon-Wiener多样性指数及均匀度指数差异均不明显。根际土壤真菌与根系内生真菌比较,春、秋两季Shannon-Wiener多样性指数和均匀度指数差异明显且根际土壤真菌高于根系内生真菌;夏季两者差异均不明显。
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桃品种特异性荧光SSR分子标记数据库构建
《果树学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：【目的】选择通用的荧光SSR分子标记建立桃种质资源基因型数据库便于进行种质特异性鉴定、资源交换、管理和利用。【方法】根据48个SSR标记对国内外669份桃品系的遗传多样性测试结果,从中选择出一部分多态信息含量较高、适合品种鉴别的标记,采用不同荧光标识组合在ABI 3130测序仪测试,为了使不同批次的测试结果准确可靠,6~8个参照品种纳入每次的测试中。【结果】用16个SSR标记基本可以判断品种的特异性,它们可以用4种荧光标识进行标记,便于分为4组在ABI遗传分析仪上测试。目前数据库包含641份材料,基因型一致的品系多为同一品种突变体和自交系演化的地方品种。文中列出了100份中国代表性种质资源分子标记数据库,并建议8个中国品系为参照。对17个桃品种进行系谱验证发现,我国资源圃所育成的7个品种系谱信息正确,但日本桃品种系谱信息与文献出现偏差。【结论】应用16个多态性高的SSR荧光标记可以构建精确的桃品种分子指纹数据库,测试方法及结果对品种特异性和系谱鉴定提供重要的参考,推动资源分子指纹数据库标准化建设工作。
