科研产出
2013年广东水禽产业发展形势与对策建议
《广东农业科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：2012年,广东水禽养殖仍主要集中在珠三角地区(鸭46.2%、鹅51.5%,略低于2011年比例),但呈现出西迁的趋势,茂名鸭饲养量赶超广州跃居全省第1位。全省采取多种措施积极应对H7N9流感等事件,但仍未能改变水禽产品价格下降的趋势。为推动广东水禽业进一步发展,重点做好以下工作:(1)加大政府对水禽业的监控力度和扶持,建设水禽生产信息体系;(2)探索水禽业补贴机制,推广水禽生产保险、风险基金和收储制度;(3)推广生态养殖模式,推动水禽养殖向现代生产方式转型升级;(4)改变活禽交易销售模式,加快冷链物流设施建设,鼓励冰鲜禽肉消费;(5)加强水禽及其关联产业的经济学研究。
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绿盲蝽超气门蛋白ALUSP的克隆、原核表达及纯化
《中国农业科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】克隆绿盲蝽超气门蛋白基因(ALUSP),获得原核表达的重组蛋白,为ALUSP的功能研究奠定基础,也为进一步解析绿盲蝽蜕皮及变态发育的机制提供理论依据。【方法】根据已知昆虫的USP基因序列设计简并引物,获得ALUSP的保守序列;再通过设计特异性引物,利用RACE方法,分别克隆ALUSP 5′及3′段序列,然后通过拼接获得ALUSP全长序列;应用生物信息学方法,对ALUSP基因序列特征及其所编码蛋白的特性进行分析,建立系统进化树;将含有ALUSP的T载体经EcoR I及Xho I双酶切,构建ALUSP原核表达载体pEGX6P1-ALUSP,将该表达载体分别在15、25、30和37℃条件下进行诱导表达,再通过GST琼脂糖亲和层析和分子筛层析后获得ALUSP功能区纯化蛋白。【结果】ALUSP开放阅读框长1 005 bp,编码334个氨基酸,预测分子量56.63 kD,理论等电点8.42;序列特征分析表明,该基因翻译后的蛋白质具有超气门蛋白的典型特征,由A/B域(249 bp)、C域(198 bp)、D域(69 bp)和E域(489 bp)组成,其中C域高度保守,包含2个锌脂结构并含有1个P-盒和1个D-盒,且含有由8个氨基酸构成的核定位信号,D域含有1个识别DNA元件的T-盒,E域含有1个由8个α螺旋和1个β折叠形成袋状结构;氨基酸比对结果表明,ALUSP的氨基酸序列与稻绿蝽USP序列一致性最高(57.82%),与其他昆虫的USP序列一致性较低,如膜翅目的 Melipona scutellaris(46.05%)、Scaptotrigona depilis(45.94%);系统进化树分析结果显示,半翅目与膜翅目、直翅目等昆虫的USP较为分化,位于不同分支,ALUSP与稻绿蝽USP进化关系最近,可能来源于共同的祖先。EcoR I和Xho I双酶切的重组克隆载体可成功亚克隆到pEGX-6P-1载体上,命名为pEGX6P1-ALUSP;经37℃、1.0 mmol·L-1的IPTG诱导的pEGX6P1-ALUSP重组质粒可特异性表达1个约65 kD的蛋白,并且该重组ALUSP蛋白主要以包涵体形式存在;收集含有目的基因的菌株进行GST琼脂糖亲和层析和分子筛层析,最后进行复性和纯化后在65 kD附近仅出现1条清晰的特异性条带,表明已得到纯化的靶蛋白。【结论】克隆了ALUSP全长,其具有昆虫超气门蛋白的典型特征,并获得了原核表达的重组蛋白。
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槭树资源圃杂草群落对复配药剂的响应
《江苏农业科学 》 2014 北大核心
摘要：为探索减少除草剂用量与用药频次情况下有效预防园艺植物资源圃杂草群落恶性发展策略,研究了槭树资源圃杂草群落总密度、总鲜重、总盖度与相对重要值等参数对草酮、百草枯、草甘膦及复配药剂的响应。结果表明,草酮与百草枯复配,药后20 d对杂草群落的抑制作用最佳,杂草量比对照减少约85%;复配药剂草酮&百草枯与草酮&草甘膦药后40 d杂草危害显著低于对照及各单剂处理,两复配剂间无显著差异。综合考察杂草群落响应参数与各杂草相对重要值RI,发现草酮与草甘膦复配比草甘膦或百草枯单剂抑草效果更好、更持久,由此可推测,草酮与草甘膦复配可大大减少每年用药频次与药剂使用总量,能在一定程度上减小化学药剂对农田生态环境带来的危害。
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鹅坦布苏病毒E蛋白结构域Ⅰ的原核表达及免疫原性鉴定
《南方农业学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】明确鹅坦布苏病毒(GTUMV)E蛋白结构域I的原核表达及免疫原性,为进一步研究GTMUV E蛋白结构的生物学特性、免疫学功能等奠定基础。【方法】通过人工合成方法获得GTMUV E蛋白结构域I的编码基因(EI基因),并与携带GST标签的p GEX-4t-1载体连接,转入大肠杆菌后经诱导表达获得融合蛋白,并以Western blotting鉴定融合蛋白是否有免疫原性。【结果】合成获得的E1基因片段为411 bp,将其插入p GEX-4t-1载体可构建重组表达质粒p GEX-4t-1-EI。阳性重组菌经1 mmol/L IPTG诱导5 h后,融合蛋白的表达量达最高峰,且以包涵体形式存在,分子量约41.0 k Da。Western blotting鉴定结果显示,融合蛋白与GST标签抗体和E蛋白阳性血清均可发生特异性反应,检测到预期的目的条带。【结论】GTMUV E蛋白结构域I可在大肠杆菌中成功诱导表达,且获得的融合蛋白具有良好的免疫原性,可用于GTMUV血清学检测试剂盒的研发。
关键词： 鹅坦布苏病毒 E蛋白 结构域Ⅰ 原核表达 免疫原性
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不同垫料组成对猪用发酵床细菌群落的影响
《农业环境科学学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为了解垫料基质中细菌的群落结构多样性,应用PCR-DGGE技术对发酵床7种不同垫料(锯木屑、稻壳、酒糟、菌糠、醋糟、稻草、稻壳炭)的细菌群落结构进行了研究,根据DGGE指纹图谱,对它们的细菌群落多样性和优势条带进行了分析。结果表明,垫料样品的细菌多样性指数、丰富度均有所不同,酒糟垫料组细菌多样性指数最高,稻草垫料组细菌多样性指数最低。全锯木屑与50%稻壳相似性较高而聚为一类,与50%菌糠次之,与50%稻草的相似性最低。在垫料基质中检测到的菌群主要是节杆菌属(Arthrobacter sp.)、Amaricoccu sp.、马杜拉放线菌属(Actinomadura sp.)、芽孢杆菌属(Bacillales sp.)、梭菌属(Clostridium sp.)、肠杆菌属(Escherichia sp.)、细杆菌属(Microbacterium sp.)、假单胞菌属(Pseudomonas sp.)、红球菌属(Rhodococcus sp.)、葡萄球菌属(Staphylococcus sp.),以及一些未知的菌群。垫料组成是影响发酵床垫料微生物构成的重要因素,稻壳、菌糠作为垫料可部分替代锯木屑,而对发酵床垫料的微生物区系影响较小。
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晚熟桃新品种‘霞晖8号’
《园艺学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：‘霞晖8号’是以‘朝晖’为母本,‘瑞光18号’为父本杂交育成的晚熟桃新品种。花蔷薇型,有花粉,自花结实,丰产稳产。果实圆形,平均单果质量246 g,大果390 g;成熟时果面80%以上着红色,外观美丽;果肉白色,硬溶质,风味甜香,可溶性固形物含量13.4%,可溶性糖10.15%,可滴定酸0.21%,粘核。在南京地区8月上中旬成熟,果实生育期132 d。
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稻曲病菌致病力丧失突变菌株B-1015的T-DNA标记基因的克隆
《中国农业科学 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】研究稻曲病菌(Ustilaginoidea virens)致病力丧失突变菌株B-1015,克隆和分析T-DNA插入位点的侧翼序列,为稻曲病菌的致病机制研究提供参考。【方法】分析稻曲病菌T-DNA插入突变体B-1015菌株的生长速率、产孢量、孢子萌发率以及致病力等生物学表型。用PCR检测T-DNA在B-1015基因组中插入的稳定性,用Southern杂交检测T-DNA插入的拷贝数,用hiTail-PCR扩增T-DNA侧翼序列,用RACE PCR克隆T-DNA标记基因,半定量RT-PCR分析所克隆基因的表达情况。【结果】与野生菌株P1相比,突变菌株B-1015的生长速率和产孢量都有较明显的降低,孢子萌发率无明显差异,致病力丧失。分子检测结果表明T-DNA在B-1015基因组中为稳定的单拷贝插入。hiTail-PCR得到的T-DNA两端侧翼序列在野生型菌株基因组上不相连,RACE PCR在两边的侧翼序列上分别克隆得到Uvt-1015R和Uvt-1015L。预测分析表明Uvt-1015R包含一个长度为948 bp的开放阅读框(open reading frame finder,ORF),可编码295个氨基酸,5′端非编码区(5′-untranslated regions,5′-UTR)长度为341 bp,3′端非编码区(3′-untranslated regions,3′-UTR)长度为271 bp。Uvt-1015L包含一个长度为351 bp的ORF,可编码116个氨基酸,5′-UTR为31 bp,3′-UTR长度为174 bp。在已知功能的蛋白中检索,没有发现与Uvt-1015R和Uvt-1015L基因同源的蛋白。序列分析发现T-DNA插入在两个基因序列中间,RT-PCR结果显示,在突变菌株B-1015中,Uvt-1015R表达量下降,Uvt-1015L不表达。【结论】稻曲病菌突变菌株B-1015致病力等重要生物学表型发生改变,可能是由于T-DNA的插入导致了B-1015基因组重排和Uvt-1015R、Uvt-1015L基因结构的破坏。
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