科研产出
通用引物检测志贺毒素和紧密素多个基因亚型
《中国人兽共患病学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：目的旨在建立同时检测stx2和intimin两个基因多个变型的双重PCR快速检测技术,更好满足实验室和临床检测的需求。方法以stx2主要的6个亚型和intimin主要的27个基因亚型为靶序列,设计引物,建立双重PCR方法,分析其敏感性、特异性,并检测模拟制备的阳性样品。结果 stx2-intimin双重PCR扩增片段分别为388bp和609bp,检测大肠杆菌纯培养物最低限介于10~100CFU/mL,增菌样品最低检测限介于1~10CFU/g,特异性检测intimin和stx2的多个亚型。结论 Stx2-Intimin二重PCR技术灵敏、特异、通用和高效。
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桃果实中酚类物质研究进展
《果树学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：酚类物质是桃果实的重要次生代谢产物,逐渐成为果实品质评价指标,选育富含酚类的桃品种也成为了育种目标之一。目前主要利用高效液相色谱法并结合质谱仪对桃果实酚类进行成分鉴定和含量分析,分离鉴定出33种,分属酚酸类、黄烷醇、黄酮醇和花色苷;果肉中酚类的种类和含量明显低于果皮;红肉桃果实中酚类含量极为丰富,是开展含有益酚类品种选育的重要材料;桃果实酚类组成和含量受到品种、成熟度、发育时期、贮藏和加工条件等因素影响;可通过套袋、铺设反光膜、不同留果量、水分管理和砧穗组合等栽培措施调控其含量;DFR、UFGT、ANR、LAR、FLS等结构基因和MYB10、bHLH3、WD40、MYBPA1等转录因子调控桃酚类物质的合成。
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实时定量PCR法预测禾谷丝核菌Rhizoctonia cerealis基因组大小
《微生物学通报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】准确测定基因组大小是进行禾谷丝核菌Rhizoctonia cerealis全基因组序列测定和拼接的基础,本研究旨在利用实时定量PCR方法预测禾谷丝核菌的基因组大小。【方法】首先克隆了禾谷丝核菌R0301菌株翻译延伸因子A基因(tef A)的部分序列,Southern杂交明确该基因在该病菌基因组中为单拷贝。以已测序立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)AG1-IA融合群菌株GD118为对照,采用实时定量PCR的方法进行了禾谷丝核菌基因组大小的预测。【结果】实时定量PCR的方法可以比较准确的测定立枯丝核菌基因组的大小,研究首次预测了禾谷丝核菌的基因组大小位于32.2–36.6 Mb之间。【结论】实时定量PCR法是一种快速和简便的预测丝核菌基因组大小的方法。
关键词： 禾谷丝核菌 基因组大小 翻译延伸因子A 单拷贝 实时定量PCR
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猪链球菌丝氨酸/苏氨酸激酶基因缺失株的构建及其致病性
《江苏农业学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：为了研究丝氨酸/苏氨酸磷激酶(STK)在猪链球菌致病过程中的作用,利用大肠杆菌-猪链球菌穿梭质粒p SET4s构建STK基因缺失株△stk。结果显示,stk基因缺失后,缺失株△stk易形成长链状结构;缺失株的半致死剂量(LD50)较亲本株高7倍,对CD1小鼠的致病能力降低;体内定植试验结果表明缺失株△stk在小鼠体内各器官的定植能力显著降低。这些数据表明STK与猪链球菌2型(SS2)的致病性相关。
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甘薯软腐病抗性鉴定方法研究及其对甘薯种质资源抗性评价
《华北农学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：通过对甘薯软腐病菌侵染甘薯的发病特征进行研究,首次建立了一种甘薯软腐病抗性鉴定的方法:每个品种取3块中等大小的薯块,经严格消毒晾干后,切薯块中部薯片,每薯块切3个薯片,每薯片厚度约为8 mm,置于放有灭菌湿润滤纸保湿的灭菌培养皿中,接种1块6 mm的甘薯软腐病菌菌碟于薯片中央,将接种好的薯片置于26℃生化培养箱中培养,期间加无菌水保湿1次。21 h后将鉴定材料取出,量取薯片发病直径,根据病斑直径进行分级,计算病情指数,进行抗感评价。该方法的建立为抗病品种的选育提供了理论依据。利用该方法对44份品种资源进行抗性评价,结果显示,鲁薯4号和广紫8号对甘薯软腐病的抗性级别为中抗;湛薯271、泰中11、渝紫1号、赣薯1号和PZJ商27E2-2对甘薯软腐病的抗性级别为感病;其余品种对甘薯软腐病的抗性级别均为高感。
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陆地棉抗黄萎病QTL的定位
《江苏农业学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：以棉花抗黄萎病品系苏抗045和感黄萎病品系苏研116为亲本构建了一个含有237个F2单株的作图群体。利用中等致病力黄萎病菌株BP2对P1、P2、F1、F2∶3家系群体进行纸钵撕底菌液醮根鉴定黄萎病抗性,计算各世代的相对病指。用2 400对SSR引物进行筛选,获得78个SSR多态性标记位点,进一步利用Join Map作图软件,构建了一张陆陆杂种遗传连锁图,包含41个标记、15个连锁群,总长为359.90 c M,覆盖棉花总基因组约7.2%。利用复合区间作图法分析,在NAU2970~MUSS138区间内检测到1个抗黄萎病QTL,可解释的表型变异为9.69%。
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基于GFP的锌指核酸酶真核细胞筛选体系的构建与验证
《畜牧兽医学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：旨在构建基于GFP报告基因的ZFN真核细胞筛选体系,为ZFN的筛选提供一种直观、准确、灵敏的方法。以pEGFP-N1为基础,去除EGFP基因的起始密码子后在多克隆位点上游插入ATG,构建筛选体系的通用载体pEGFP-ATG。将ZFN的靶序列插入到通用载体EGFP基因上游,且使起始密码子和EGFP基因处于不同ORF中,构建筛选载体pEGFP-728。将pEGFP-728转入Hela细胞中,G418筛选Hela-728细胞系,转染ZFN到Hela-728,48h内通过观察荧光判断ZFN是否有效,挑取荧光细胞进行PCR、测序验证靶序列的敲除。测序分析表明,通用载体pEGFP-ATG和含靶序列的筛选载体pEGFP-728序列完全正确;pEGFP-728转入Hela细胞中观察不到绿色荧光,说明靶序列插入后使EGFP发生移框;转染靶序列对应的ZFN到Hela-728中,48h观察到荧光的表达,说明ZFN有效;挑取6个荧光细胞单克隆,PCR、测序表明4个克隆靶序列发生缺失突变。锌指核酸酶真核细胞筛选体系构建成功。相对于其他方法本筛选体系更加准确、直观、灵敏,更适用于动植物等真核细胞的ZFN筛选,同时还可应用于TALEN和CAS9的筛选。
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