科研产出
基因Ⅵb亚型半番鸭源新城疫病毒基因组测序及分析
《华南农业大学学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：根据GenBank上发布的新城疫病毒基因组序列,设计了9对引物,对从福建福州地区发病半番鸭场分离的新城疫病毒FJ-SMD-03株进行了基因组cDNA扩增测序和分析.结果表明:FJ-SMD-03的基因组序列由15 192 nt组成,在NP基因非编码区比Lasota株多了6个核苷酸ACACTC;基因组由6个ORF组成,即3'-NP-P-M-F-HN-L-5'序列.BLAST结果显示:FJ-SMD-03基因组核苷酸与1.3、carrier-pigeon/Guangdong/2008、pigeon/Italy/1166/00、AV324/96和dove/Italy/2736/00相似性最高,达94.9%~98.5%;与疫苗株Lasota、Mukteswar和B1的相似性最低,为80.7%~83.3%;与我国标准强毒株F48E8及2002年从福建番鸭中分离到的基因Ⅶd亚型强毒株Muscovy duck/China(Fujian)/FP1/02相似性较低,分别为82.5%和87.1%.F蛋白裂解位点的氨基酸序列为112 R-R-Q-K-R-F117,具有强毒株序列特征,进化树分析发现,FJ-SMD-03属于ClassⅡ类基因Ⅵb亚型,证明鸭群中有Ⅵb亚型NDV强毒株;FJ-SMD-03株NDV与1.3、carrier-pigeon/Guangdong/2008和pigeon/Italy/1166/00亲缘关系较近,与carrier-pigeon/Guangdong/2008形成一个小的进化分支,推测FJ-SMD-03株与carrier-pigeon/Guangdong/2008和pigeon/Italy/1166/00株来源于共同的祖代毒株,可能与鸽携带的病毒有关.
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番鸭呼肠孤病毒分子流行病学研究
《福建农业学报 》 2012
摘要：选取1998～2009年福建省不同地区番鸭中分离到番鸭呼肠孤病毒分离株中具有代表性的10株,用RT-PCR技术扩增其S1和S4基因的功能区片段,进行序列测定。序列分析表明所扩增的S1基因的目的片段为819bp,S4基因目的片段为992bp。参照国内外已发表的部分毒株S1和S4基因序列,构建番鸭呼肠孤病毒的遗传进化树,分析遗传进化关系。国内各分离株S1基因同源性为92.2%～96.7%,与国外89026株同源性为88.5%～92.8%,与禽呼肠孤病毒S1133株同源性为76%～78%。国内各分离株S4基因同源性为95.2%～99.3%,与国外89026株同源性为92.3%～94.5%,与禽呼肠孤病毒S1133株同源性为21.2%～21.5%。通过遗传进化树可以看到MDRV与同属的ARV序列形成了2个大分支,而MDRV序列分为2个小分支:一支为10株分离株和国内分离株,说明国内分离株没有明显差异;一支为国外分离株89026株,这说明国内分离株与国外毒株存在地域差异。
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正红菇菌丝体凝集素的分离纯化及生化特性
《菌物学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：正红菇菌丝体经磷酸缓冲液浸提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose FF离子交换层析和Sephadex G-100分子筛层析纯化得到红菇凝集素(Russula vinosa Lectin,RVL)。经SDS-PAGE检测为单一蛋白带,其亚基相对分子质量为55kDa,Sephadex G-100凝胶过滤测得相对分子质量为55.25kDa,提示RVL分子只有一个亚基。RVL中性糖含量为3.87%,经酸水解测定含15种氨基酸。温度在20–60℃、pH在5–9的范围内,凝集活性保持相对的稳定。RVL的凝血活性受Mn2+、Zn2+、Ca2+的影响。糖抑制实验表明,在供试的11种糖中,D-甘露糖强烈抑制RVL的凝血活性。抑菌实验显示,RVL对供试的细菌没有抑制作用,对稻瘟病菌、绿色木霉、红色链包霉、黑曲霉菌丝生长有显著的抑制作用。
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朱砂根愈伤组织培养及悬浮细胞系建立
《热带亚热带植物学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：以朱砂根(Ardisia crenata Sims.)无菌苗的茎段、叶片、胚轴和胚根为外植体进行愈伤组织诱导研究。结果表明:胚根在含有2,4-D的培养基中的诱导率最高,在添加5 mg L-1 AgNO3的MS+2,4-D 0.5 mg L-1+KT 0.01 mg L-1培养基中继代培养的增殖系数高达8倍以上。培养中获得了5种类型的愈伤组织(I-白色湿软状、Ⅱ-白色冰砂状、Ⅲ-淡黄色颗粒状、Ⅳ-黄绿色块状和V-绿色块状),其中Ⅱ和Ⅲ型愈伤组织可以成功建立悬浮细胞系,用M S+2,4-D 0.5 mg L-1+KT 0.01 mg L-1培养基进行固-液轮回培养,可以较好地保持悬浮细胞系。
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硝化抑制剂对小白菜内源硝酸盐代谢的影响
《中国生态农业学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：为了提高蔬菜体内硝态氮的代谢有效利用性,采用土培盆栽试验方法,以NO3-N︰NH4+-N为2︰3的处理(以S1表示)为对照,研究在对照基础上分别添加3种硝化抑制剂(即,双氰胺、咪唑、吡啶,分别以S2、S3、S4表示)对小白菜内源硝酸盐代谢的影响。结果表明:3种硝化抑制剂的添加可提高小白菜产量6.06%~28.55%,增加植株氮吸收量2.38%~38.42%,降低蔬菜硝酸盐含量2.69%~19.66%,分别提高小白菜叶片硝酸还原酶活性、叶肉细胞硝态氮的代谢库大小和贮藏库大小24.28%~77.32%、29.45%~272.17%和2.78%~17.38%,并增加代谢库与贮藏库的比值0.04%~0.59%,从而提高了小白菜内源硝酸盐的有效利用性。其中,以S2处理对提高小白菜内源硝酸的有效利用性相对最佳,植株产量和植株氮吸收量相对最高,分别为56.72 g.盆1和0.156 g.盆1;植株硝酸盐含量较低,为1 749 mg·kg-1;而叶片的硝酸还原酶活性和叶肉细胞硝态氮代谢库相对最高,分别为1.90μg(NO2-N).30 min-1·g-1(FW)和0.33μg(NO2-N)·g-1(FW)。
关键词： 硝化抑制剂 小白菜 内源硝酸盐 氮代谢 硝酸盐有效性
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食用菌多糖酶法提取工艺研究进展
《现代农业科技 》 2012
摘要：阐述食用菌多糖的生物活性,基于单一酶法与复合酶法介绍食用菌多糖酶法提取工艺的研究概况,以期为食用菌多糖酶法提取的开发应用提供参考。
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转Cry1Ac/CpTI栽培稻外源基因渗入普通野生稻中可稳定的遗传和表达
《分子植物育种 》 2012 CSCD
摘要：转基因水稻的研发以及环境释放,外源基因通过花粉逃逸到野生近缘种中,可能带来的生态效应愈来愈受到人们的关注。本研究采用人工杂交技术将Cry1Ac/CpTI双价抗虫基因从转基因栽培稻渗入普通野生稻(Oryza rufipogon Griff.)中,获得普通野生稻F1及分离后代F2、F3、F4、F5和回交后代BC1F1和BC1F2,并对渗入外源基因的普通野生稻中的外源基因的遗传和表达进行了分析,试图阐明转基因栽培水稻外源基因的逃逸,可能在近缘野生栽培稻中稳定遗传的事实。研究结果显示:在野生栽培稻中外源基因的拷贝数与转基因的供体栽培稻完全一致。外源基因在普通野生稻中传代过程中插入位点的遗传也是稳定的。Cry1Ac杀虫蛋白在野生稻的不同世代中的表达模式和表达量与其转基因的供体栽培稻大致一致。本研究说明,转基因水稻外源基因一旦逃逸,有可能渗入近缘野生稻中,并在近缘野生稻中可稳定的遗传与表达,但转基因水稻外源基因逃逸是否对其近缘物种造成非预期生态效应还需要进一步对其进行生态适合度评价。
关键词： 栽培稻 普通野生稻 转基因水稻 Cry1Ac/CpTI基因 遗传与表达 生态风险
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一种适于cDNA-AFLP分析的茶树叶片总RNA提取方法
《现代农业科技 》 2012
摘要：茶树富含多糖、多酚,从茶树组织中提取高质量的RNA较为困难,cDNA-AFLP技术对RNA质量要求较高,因而从茶树叶片中提取高质量的RNA是cDNA-AFLP试验正常进行的重要保障。该试验采用改进的CTAB法从茶树叶片中提取总RNA,结果表明:琼脂糖凝胶电泳显示28S、18S、5S 3条带清晰,完整性好,产率高;A260/A280值为2.07,范围为1.8~2.1,DNA和蛋白质污染较少;经逆转录、双链cDNA合成和cDNA-AFLP检测,证实提取的RNA能满足cDNA-AFLP技术对RNA质量和数量的要求。该方法为应用cDNA-AFLP技术顺利开展茶树分子生物学方面的研究奠定了基础,处理方式简单且成本较低。
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应用胶乳凝集技术诊断番鸭小鹅瘟病
《中国预防兽医学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：为建立番鸭源小鹅瘟病毒(GPV)快速检测方法,本研究采用GPV单克隆抗体(MAb)标记聚苯乙烯胶乳,建立了检测GPV抗原的胶乳凝集试验(LPA)。结果显示:LPA具有较好的敏感性,可以检出GPV最低毒价为1 000 TCI50/10μL;特异性强,仅与GPV产生特异性凝集反应,与其他相关鸭源病毒均无交叉反应;重复性和稳定性好,在4℃保存期达11个月;对人工感染病例的LPA检测结果与PCR符合率为93.3%;对临床18份疑似GPV病例进行检测,LPA和PCR符合率为94.5%。表明LPA具有简便、快速、特异、准确等优点,适用于基层快速诊断番鸭小鹅瘟病。
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