科研产出
黏质沙雷氏菌C8-8几丁质酶基因的克隆与表达
《江苏农业学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：利用PCR方法从黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens)C8-8中克隆到编码几丁质酶的chiA基因,大小为1 692 bp,推测其编码一条长563个氨基酸的多肽链,分子量约为60 900。同源分析研究结果表明从C8-8中克隆的chiA基因序列与黏质沙雷氏菌株141(DQ 990373.1)和14041菌株(DQ 493896.1)的chiA基因序列相似性最高,达到99%。结构域分析结果表明从C8-8中克隆的chiA基因N末端(23 AA)存在典型的信号肽序列,C端存在另外两个结构域,即PKD区(73 AA)和几丁质酶催化区(387 AA)。采用大肠杆菌表达系统重组表达chiA基因,结果表明重组菌株在几丁质诱导培养基上能产生透明的水解圈。采用SDS-PAGE电泳分析,结果表明chiA重组表达产物的相对分子质量约为60 000,与预测分子量大小基本一致。初步提纯后,生物活性试验结果表明该重组表达产物能水解几丁质,在几丁质培养基上产生透明的水解圈。
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两种甜菜夜蛾致病菌的分离、鉴定及杀虫成分初步分析
《江苏农业学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：从室内饲养的甜菜夜蛾患病死亡虫体中分离、纯化出5个细菌菌株,进行毒力测试,筛选出对甜菜夜蛾具有较高致病力的菌株B30和B32。通过革兰氏染色、常规形态学观察及16S rDNA序列分析,将B30和B32分别鉴定为黏质沙雷氏菌Serratia marcescens和类芽孢杆菌Paenibacillus cookii。杀虫活性成分分析显示,2个菌株培养液的菌体沉淀破碎液对甜菜夜蛾的致病力高于上清液;上清液和菌体破碎液经蛋白酶K处理后致病力均显著降低。由此推断,两种致病菌的杀虫活性成分主要是胞内蛋白质。
关键词： 甜菜夜蛾 16S rDNA 黏质沙雷氏菌 类芽孢杆菌 杀虫成分
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ABA、BA及DPI对高表达玉米C_4pepc基因的水稻光合特性及叶绿素荧光特性的影响
《植物生理学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：为阐明水稻高表达玉米C4型磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因(C4phosphoenolpyruvate carboxylase,C4pepc)出现高光效的分子机理,以盆栽转C4pepc水稻(PC)及野生型Kitaake(WT)为材料,花后7d茎吸入脱落酸(abscisic acid,ABA)、正丁醇(n-butanol,BA)及氯化二亚苯基碘(diphenyleneiodonium,DPI),考察其对叶片光合特性及酶活性等影响。结果表明:(1)与ABA处理不同,DPI和BA处理下PC的Pn均呈现先增加后下降的趋势,BA处理0.5h时Pn明显增加,原因主要是由于气孔导度的增加;(2)ABA、BA和DPI对Fv/Fm的影响不明显,与WT相比,PC的qP下降少;(3)BA处理后PC的PEPC活性降低了26%,而DPI处理则增加了48%。各处理并未对PEPC蛋白和基因的表达有影响。
关键词： pepc转基因水稻 H2O2 正丁醇 ABA 光合特性
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转PEPC和PPDK双基因水稻孕穗期光合生理日变化
《江苏农业科学 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：以转PEPC和PPDK双基因水稻为材料,测定了水稻剑叶在孕穗期的净光合速率(Pn)、叶绿素荧光参数初始荧光产量(F0)、最大光化学量子产量(Fv/Fm)及叶绿素性能指数PI(abs)的日变化;同时分析了在自然条件下,转PEPC和PPDK双基因水稻叶片部分抗氧化酶SOD、POD、CAT的诱导活性,超氧阴离子(O2.-)产生速率以及膜脂过氧化产物丙二醛(MDA)含量的日变化规律。结果表明:转PEPC和PPDK双基因水稻与原种R299在自然条件下都随时间的推移而表现出Fo先升后降,Fv/Fm、PI(abs)先降后升,保护酶SOD、POD、CAT诱导活性先升后降,O2.-、MDA逐渐积累的现象,与原种水稻相比,转PEPC和PPDK双基因水稻随高温高光逆境的加剧,SOD、POD、CAT诱导活性逐步增强且维持较高水平,O2.-的产生速率较低,MDA积累较少,维持较稳定的光系统Ⅱ活性和较高光合能力,比原种水稻更具耐光优势。
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根据cpDNA trnT-trnF序列变异分析中国互花米草种群的遗传结构
《草业学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：采用直接测序法,测定了中国沿海互花米草8个种群80个样本的叶绿体trnT-trnF序列。结果显示,2个单碱基的插入/缺失将80个序列分为3种单倍型,3种单倍型在美国东海岸均有分布,且属于美国分布最广泛的C单倍型;中国种群的单倍型多样性Hd为0.379,远低于美国原产地;种群间基因分化系数Gst为0.103、固定指数Fst为0.092;AMOVA分析揭示种群间仅有9%的遗传差异。研究结果表明,中国互花米草种群受瓶颈效应影响明显,种群间遗传变异较低,种群内多样性相对较高。
关键词： 互花米草 cpDNA trnT-trnF 单倍型 遗传结构
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猪Hokovirus PCR检测方法的建立及其应用
《中国预防兽医学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：猪Hokovirus(PHoV)是近年来在香港发现的一种猪细小病毒。为及时评估该病毒在我国的感染及流行情况,本研究根据GenBank中登录的PHoV核苷酸序列设计并合成一对特异性引物,建立了PHoV的PCR检测方法。研究结果表明,所建立的PCR检测方法特异性强,对其它的猪主要病毒无交叉反应;敏感性较高,最低可以检测2.4×104拷贝/μL;而且重复性较好。采用该方法对2009年～2010年我国华东地区猪场的318份临床样品进行检测,结果显示38份样品为PHoV阳性,表明我国猪群中存在PHoV感染。本研究建立的PCR方法可以作为在临床上检测PHoV的一种有效手段。
关键词： 猪Hokovirus 聚合酶链式反应 检测
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双瓣茉莉离体微繁技术
《江苏农业科学 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：以双瓣茉莉带腋芽的茎段为外植体,在附加不同浓度TDZ、6-BA、IBA、NAA的WPM培养基、MS培养基上进行离体培养,建立起双瓣茉莉组织培养快速繁殖的技术体系。适宜的腋芽诱导培养基为WPM+6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.5 mg/L;芽的继代增殖培养基为WPM+6-BA 2.0 mg/L+IBA 0.1 mg/L;成苗培养基为WPM+6-BA 0.1或0.2 mg/L+IBA 0.2 mg/L;生根培养基以蛭石代替琼脂,附加1.0 mg/L的NAA。
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绿盲蝽丝氨酸蛋白酶基因AlSP3的鉴定及表达谱分析
《江苏农业学报 》 2012 北大核心
摘要：从绿盲蝽成虫体内克隆了1个丝氨酸蛋白酶基因,命名为AlSP3(GenBank序列号JQ609681)。经序列分析,该基因开放阅读框长1 041 bp,编码346个氨基酸,预测分子量为3.872×104,理论等电点为9.35,N-末端疏水区包含有19个氨基酸组成的信号肽。蛋白质特征分析结果表明,该基因翻译后的蛋白质具有丝氨酸蛋白酶的典型特征。利用荧光定量PCR技术对绿盲蝽取食不同寄主植物后AlSP3基因的表达谱进行分析,结果表明:相对于其他寄主植物,雌成虫取食转Bt基因棉花后AlSP3基因的表达量最高,比对照上升了11.62倍,并显著高于取食常规棉(P<0.01);雌成虫取食常规棉后,AlSP3基因的表达量上升了6.42倍,仅次于取食Bt棉和豇豆,并显著高于取食其他寄主植物(P<0.01)。雄成虫取食常规棉后,AlSP3基因的表达水平仅次于取食蚕豆,上升了9.37倍,并显著高于取食Bt棉(P<0.01)。由此可见,AlSP3基因是绿盲蝽成虫取食常规棉后的重要消化酶基因,并对雌成虫适应取食Bt棉具有重要作用。
