科研产出
NF-κB信号通路激活剂LPS/抑制剂SN50对鸭肠炎病毒增殖影响的研究
《中国预防兽医学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：为探究NF-κB信号通路对鸭肠炎病毒（DEV）增殖的影响,本实验分别以不同终浓度的NF-κB信号通路激活剂LPS（2.0μg/mL、4.0μg/mL、6.0μg/mL）和抑制剂SN50（25.0μg/mL、50.0μg/mL、75.0μg/mL）处理鸭胚成纤维（DEF）细胞后,采用CCK8法分析LPS或SN50对DEF细胞活性影响;利用不同浓度的LPS或SN50预处理DEF细胞4 h后,再于12 h120 h后收获细胞和上清液（未感染DEV）;上述经LPS或SN50预处理细胞4 h后接种DEV（MOI 0.01）,12 h120 h后（每间隔12 h）分别收获细胞及上清液,采用荧光定量PCR方法分别检测上述未感染和感染DEV的DEF细胞中NF-κB1基因和DEV NP基因的转录水平;采用ELISA方法分别检测上述未感染和感染DEV的DEF细胞上清液中NF-κB信号通路关键因子（IL-1β、IL-6和MyD88）的表达水平。结果显示:不同浓度的LPS和SN50处理对DEF细胞均无明显毒性作用。荧光定量PCR结果显示,经不同浓度LPS预处理,均能有效提高DEF细胞中NF-κB1基因的转录水平,其中4.0μg/mL LPS处理的DEF细胞中NF-κB1基因转录水平最高;而在LPS预处理再感染DEV后,4.0μg/mL LPS和6.0μg/mL LPS处理的DEF细胞中NF-κB1基因转录水平整体上调（p<0.05）,2.0μg/mL LPS处理的DEF细胞中NF-κB1基因的转录水平整体下调（p<0.05）;不同浓度的SN50预处理后,未感染和感染DEV的DEF细胞中,均以50.0μg/mL SN50处理的细胞中NF-κB1基因的转录水平下调效果最好（p<0.05）。LPS预处理DEF细胞后感染DEV,12h84 h DEV NP基因的转录水平均受到明显抑制（p<0.01）,84 h后2.0μg/mL和6.0μg/mL LPS均会促进DEV NP基因的转录水平;而经SN50预处理DEF细胞后感染DEV,细胞中DEV NP基因的转录水平均显著下降（p<0.01）。ELISA结果显示,经LPS预处理后,不感染或感染DEV,DEF细胞中IL-6表达量整体稍呈下降趋势（p>0.05）,而IL-1β和MyD88的表达则呈无规律变化;经SN50预处理后不感染或感染DEV,DEF细胞中IL-1β、IL-6和MyD88的表达均无规律变化。以上研究结果表明,不同浓度LPS均可促进正常DEF细胞中NF-κB1基因的转录,而DEV则可以阻断低浓度LPS（2.0μg/mL）的这种促进作用。不感染或感染DEV,SN50均于高浓度（50μg/mL和75μg/mL）时才能有效降低NF-κB1基因的转录水平;不同浓度的LPS或SN50均对NF-κB通路关键因子的表达基本无影响;LPS在DEV感染后期才能促进其增殖,而SN50则可以有效抑制DEV的增殖。本研究为阐明NF-κB信号通路与DEV之间的相互作用关系奠定了实验基础。。
关键词： 鸭肠炎病毒 鸭胚成纤维细胞 NF-κB信号通路 激活剂LPS 抑制剂SN50 增殖
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高羊茅FaCCA1基因克隆、表达分析及基因编码蛋白的亚细胞定位
《植物生理学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：生物钟节律基因（circadian clock gene） CCA1在植物光周期途径中具有十分重要的作用。以高羊茅‘黔草1号’ cDNA为模板,利用同源扩增结合cDNA末端快速扩增（rapid amplification of cDNA ends, RACE）技术从高羊茅中获得与拟南芥CCA1高度同源的cDNA全长序列,命名为FaCCA1。利用BLAST在线软件对该基因进行生物信息学分析,通过农杆菌介导的烟草瞬时表达,观察Fa CCA1基因编码蛋白的亚细胞定位,并利用RT-qPCR技术分析不同光照条件下FaCCA1基因表达水平。结果表明,该序列cDNA全长为2 433bp,含有一个完整的开放阅读框,长度为2 148 bp,编码蛋白含有715个氨基酸,蛋白分子量为77.80 kDa,理论等电点为5.91。亚细胞定位结果显示FaCCA1基因所编码的蛋白定位于细胞核。系统进化树分析表明FaCCA1与禾本科植物的CCA1蛋白亲缘关系较近,其中与大麦亲缘关系最近,达到80%以上。FaCCA1基因表达量在长日照高于短日照,表达水平出现昼夜节律钟变化模式,表明高羊茅FaCCA1表达量受光周期调控。这为高羊茅FaCCA1基因的功能研究提供参考资料,为高羊茅的分子育种利用提供了改良靶标。
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贵州引进甘薯种质资源形态标记聚类分析
《种子 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：以引进的33份甘薯种质资源为试验材料,利用形态标记聚类分析法,研究材料间亲缘关系,为贵州甘薯新品种选育提供参考。结果表明,在欧式聚类9.71处,可将33份材料分为两大类群,类群Ⅰ包括31份材料,分成两个亚群;类群Ⅱ包括两份材料。同一类群的性状相差小,欧氏距离相近;类群间的性状差异较大,欧氏距离相差大。
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高羊茅FaGI基因克隆、表达及启动子分析
《农业生物技术学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：GI （GIGANTEA）是节律相关基因,在植物控制节律输出和开花调控中具有重要作用。为探索GI基因在高羊茅（Festuca arundinacea）中的生物学功能,本研究运用cDNA末端快速扩增法（rapid amplification of cDNA ends, RACE）克隆和染色体步移法扩增得到该基因序列和启动子序列,并对其进行生物信息学分析。序列分析表明,FaGI基因（GenBank No. MZ540915）序列全长3 869 bp,其开放阅读框为3 447 bp,编码1 149个氨基酸。启动子序列2 371 bp,有CURECORECR、GT1CONSENSUS、LTRE1HVBLT49和MYB识别位点多个顺式作用元件。系统进化树表明,FaGI基因编码的蛋白与草甸羊茅（Festuca pratensis）、黑麦草（Lolium perenne）、黑麦（Secale cereale）和小麦（Triticum aestivum）等禾本科植物同源蛋白的进化关系比较近。亚细胞定位显示其定位在细胞核,说明该蛋白可能在细胞核中发挥作用。荧光定量分析不同光照处理和不同发育阶段下的表达模式。结果显示,FaGI基因的表达受光周期和生物钟的调控,不同发育时期其表达量不同,苗期的表达量最高,进入生殖生长阶段其表达量下降。构建p1300-FaGI过表达载体转化拟南芥（Arabidopsis thaliana）,结果显示,FaGI过表达拟南芥能上调AtCCA1（CIRCADIAN CLOCK ASSOCIATED 1）和AtTOC1 （TIMING OF CAB EXPRESSION 1）表达,下调AtFT（FLOWERING LOCUS T）和AtCO （CONSTANS）表达。该研究结果为后续验证高羊茅FaGI基因功能提供理论依据。
关键词： 高羊茅 高羊茅GIGANTEA （FaGI）基因 启动子克隆 表达分析
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薏苡糠壳的化学成分及其种子萌发活性研究
《热带亚热带植物学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：为了解薏苡（Coixlachryma-jobi）糠壳的化学成分,利用多种柱色谱技术对其乙醇提取物乙酸乙酯萃取部位进行分离,经波谱数据分析鉴定了15个化合物,分别为香豆酸（1）、香豆酸甲酯（2）、2-羟乙基-香豆酸酯（3）、咖啡酸甲酯（4）、阿魏酸甲酯（5）、（E）-3-（4-甲氧基苯基）丙烯酸（6）、2,3-二羟基-1-（4-羟基-3-甲氧基苯基）-1-丙酮（7）、2,3-二羟基-1-（4-羟基-3,5-二甲氧基苯基）-1-丙酮（8）、对羟基苯甲酸（9）、3-羟基-4-甲氧基苯甲酸（10）、1,3,5-三甲氧基苯（11）、methyl （3-hydroxy-2-oxo-2,3-dihydroindol-3-yl）-acetate （12）、尿囊素（13）、2-（2-羟乙基）-3-甲基反丁烯二酸（14）和油酸（15）,其中化合物3、7、12、13和14为首次从薏苡中分离得到。活性测试结果表明,化合物1、2、9、10和11对种子萌发具有较强的抑制作用。
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玉米dhn1和dhn2基因渗入普通自交系的分子标记辅助选择研究
《种子 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：干旱是影响玉米生产的主要限制因子,为创制玉米耐旱性种质,以CIMMYT引进的耐旱种质CML 538、CML 539和普通玉米自交系PH 6 WC、QR 273、LX 9081为材料,利用常规技术构建回交群体,采用分子标记辅助选择（Marker assisted selection, MAS）技术,将耐旱主效基因渗入普通玉米自交系中。从构建的6个群体,经分子标记辅助选择,共获得22份材料,其中,dhn1渗入的材料1份,dhn2渗入的材料19份,同时渗入dhn1和dhn2的材料2份。经种子萌发期耐旱性鉴定,与轮回亲本相比,22份材料耐旱性均有不同程度的提高,其中,中等及以上耐旱型材料18份。研究表明,采用MAS技术实现玉米耐旱主效QTL（或基因）的渗入可以有效提高玉米耐旱性,对玉米耐旱种质遗传改良和育种应用有着重要意义。
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利用分子标记辅助选择技术创制耐铝玉米种质
《南方农业学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：【目的】将耐铝主效基因导入普通玉米自交系,筛选出耐铝玉米株系,为拓宽玉米耐铝种质资源及耐铝育种提供理论参考。【方法】以玉米耐铝材料（CML530、CML532、CML533和CML534）和普通玉米自交系（西1、9058和LX9801）为材料,构建6个回交群体,基于分子标记辅助选择技术,利用与耐铝基因Zm M1、Zm M2、Zm ASL和Zm ALMT2紧密连锁的分子标记（umc1468、ZmMATE1、ZmMATE2、MateF2和ALMT93496）进行靶基因选择,将耐铝主效基因导入到普通玉米自交系,结合植株田间表现,筛选出耐铝的稳定株系,并对其进行耐铝鉴定。【结果】在分离世代（BC1F1/S1）苗期对6个回交群体共581个株系进行靶基因选择,结果有69个株系中选,结合植株田间表现,最终获得17个稳定株系。基于分子标记检测结果,17个稳定株系的遗传背景恢复率为73.9%～93.8%,平均为83.4%。0.2 mmol/L AlCl3溶液处理下17个稳定株系的根系生长均受到不同程度的抑制,根净增长度平均值为0.81 cm,极显著低于对照（0.5 mmol/L CaCl2溶液）（P<0.01,下同）;稳定株系的根相对伸长率与轮回亲本差异达极显著水平;17个稳定株系的根相对伸长率为64.50%～83.33%,平均为74.74%,均为中等及以上耐铝株系,其中NS1、NS9、NS10、NS15和NS16为高耐铝株系。【结论】通过分子标记辅助选择技术可将耐铝主效基因导入普通玉米自交系,且导入多个耐铝基因株系的耐铝性较同一群体中导入单个耐铝基因的株系均有不同程度提高,表明多个耐铝基因累加可提高耐铝性。可见,该技术可作为耐铝玉米种质创制的有效手段。
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基于形态学和ISSR分子标记的迷你甘薯遗传多样性分析
《种子 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：以浙江引进的16份迷你甘薯主推品种及潜力品系为对象,采用形态学性状聚类分析和ISSR荧光标记毛细管电泳技术进行遗传多样性分析。结果表明,基于21项形态学性状的聚类图,在欧式距离为8.69处可分为两大类群,类群Ⅰ:浙13、浙33和QZ 66;类群Ⅱ为:浙259、S 8、浙20、浙15、浙132、浙255、心玉、心香、红香蕉、浙6025、浙70、浙75和JS-84。ISSR分子标记分析表明,利用6对引物共进行PCR扩增,迷你甘薯种质资源的观测等位基因（Na）为3个,平均有效等位基因数（Ne）为2.351 7个,期望杂合度（He）为0.218 6,香农指数（I）为0.634 6,通过NTSYSpc 2.1软件进行聚类分析,在遗传距离为1.05时,16份供试迷你甘薯材料可分为两大类。部分供试材料的ISSR标记聚类结果与形态学标记在遗传背景和类群划分上具有一致性,但是两种鉴定分类方法的聚类分析结果也存在一定差异。迷你甘薯种质材料遗传多样性丰富,将形态学及ISSR标记结合能有效提高品种间特异性的鉴定,更能客观、准确地确定种质资源的亲缘关系。
关键词： 迷你甘薯 形态学 聚类分析 ISSR荧光标记 遗传多样性
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黄化茶树新梢色素和主要生化成分含量变化特征及其相关性分析
《西北植物学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：以茶树黄化品种'中黄3号'('ZH3')和常绿品系'苔茶15'('TC15')为材料,检测其4、5、7、8月新梢(一芽二叶)色素和主要生化成分含量,探讨不同月份黄化茶树新梢色素和主要生化成分累积的特征以及它们之间的关系.结果表明:(1)新梢叶绿素a、总叶绿素含量在两种茶树中均随生育期先降低后上升,叶绿素b含量变化趋势不同,但均以8月份最高,'ZH3'叶绿素b含量在4、5月份分别比'TC15'低41.9%、54.9%,在7、8月份分别比'TC15'高47.5%、22.1%;新梢类胡萝卜素含量在'ZH3'中呈递减趋势,而在'TC15'中表现为先下降后上升再下降;花青素含量在两种茶树中均先上升后下降,在4、5、8月份'ZH3'略高于'TC15',在7月份'ZH3'比'TC15'低26.4%.(2)两种茶树新梢的花青素含量在总色素中占比均先增加后降低,总叶绿素含量占比则表现先降后升的变化趋势;类胡萝卜素含量占比在'ZH3'中呈递减趋势,而在'TC15'中先递减后小幅上升.(3)两种茶树新梢的游离氨基酸含量均先降低后上升并以4月份最高,茶多酚含量则均先升后降并以7月份最高,'ZH3'水浸出物和咖啡碱含量在月份间变化不显著.(4)'ZH3'新梢的游离氨基酸、水浸出物和咖啡碱含量与各色素含量相关均不显著,而其茶多酚含量与叶绿素a、叶绿素b、总叶绿素含量均呈显著正相关关系,与类胡萝卜素含量呈显著负相关关系;'TC15'新梢的水浸出物和茶多酚含量与花青素含量、游离氨基酸含量与总叶绿素含量、咖啡碱含量与叶绿素a以及总叶绿素和类胡萝卜素含量均呈显著正相关关系.研究发现,黄化茶树品种'中黄3号'新梢颜色越黄,类胡萝卜素、游离氨基酸含量越高,叶绿素a、叶绿素b、茶多酚含量越低,叶绿素a/b值较高,花青素含量适中,茶树新梢色素含量与其主要生化成分含量关系密切.
关键词： 黄化茶树;新梢;色素;生化成分;相关性
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黔中金荞麦品种比较研究
《种子 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：2017—2019年在贵州省贵阳市对黔中金荞麦、野生金荞麦（原始群体）及开阳金荞麦进行品比试验,观测各品种的生育期和抗逆性、茎叶比、叶面积和鲜干草产量。结果表明,黔中金荞麦适应性强,品质好、抗逆性强;黔中金荞麦3年平均干草产量为15 808.4 kg·hm-2、原始群体为14 227.6 kg·hm-2、开阳金荞麦为12 875.4 kg·hm-2,黔中金荞麦三年平均产量高于原始群体11.11%、高于开阳金荞麦22.79%;2017—2019年黔中金荞麦干草产量和开阳金荞麦间差异极显著（p<0.01）,与原始群体差异显著（p<0.05）。
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