phaC1、phaC2基因双价植物表达载体的构建及其转基因烟草的获得

郑军荣; 周鹏; 洪葵; 《分子植物育种 》 2003 CSCD

摘要：利用聚合酶链式反应 (PCR)技术 ,从类产碱假单胞菌YS1(PseudomonaspsuedoalcaligeneseYS1)染色体DNA中扩增并克隆了调控短链与中链PHA生物合成的两个关键酶基因 :phaC1、phaC2基因。同时利用套叠PCR技术对 phaC1基因进行了改造 ,经过基因拼接构建了植物表达载体pC3C1(嵌合phaC1)、pC3C2 (嵌合 phaC2 )和 pC3C1C2 (嵌合 phaC1和 phaC2双基因 )。将构建好的嵌合 phaC1和phaC2双基因的植物高效表达载体 pC3C1C2 ,用冻融法转入根癌土壤杆菌 (AgrobacteriumtumefaciensEHA10 5 )并且通过农杆菌介导的叶盘法转化烟草 (NicotianatobacumHonghuadajinyuan)。 2个月后获得了一批卡那霉素抗性烟草植株 ,抗性植株大田生长表型正常 ,生长速度相对缓慢。抗性植株经过PCR、PCR Southern、Southern检测初步确定有 32 %烟草稳定整合了 phaC1和 phaC2。用氯仿 -次氯酸钠直接从部分Southern检测阳性转化植株中抽提纯化得到PHA ,在产物合成水平确证有 2 5 6 %的转基因植株

关键词： phaC1基因改造 双价植物表达载体 转基因烟草 聚-3-羟基脂肪酸脂

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橡胶树优良无性系热研5-11选育初报

李维国; 张伟算; 黄华孙; 《热带作物学报 》 2003 CSCD

摘要：橡胶树热研5-11是四生代无性系,亲本为热研56-5x热研88-13,经初级系比试验5割年及高级系比6割年的干胶产量和副性状的鉴定,结果表明:热研5-11是一个早熟、高产的品种,树围生长与对照(RRIM600)相当,高比区前6割年平均年干胶产量为5.86 kg/株和2 253kg·hm-2,分别比对照高93.4％和65.3％;抗风力一般,风害断倒率为3.0％,比对照高0.7个百分点,无显著差异:第6割年末死皮停割率为4.2％,比对照高1.9个百分点。该品种可在海南岛中西部轻风害区种植。

关键词： 橡胶树 优良无性系 热研5-11

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结核免疫与结核新疫苗的研究进展

张更林; 周鹏; 《分子植物育种 》 2003 CSCD

摘要：本文对近十多年来有关结核免疫的生物学机制和结核疫苗研究进展进行了综述 ,指出结核疫苗的发展方向 ,尤其指出植物疫苗是最为廉价、有前途的发展之路。

关键词： 结核病 抗结核病苗 植物疫苗 免疫

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毕赤氏酵母SMD1168/HuIFNα-2b分泌型表达的研究

周鹏; 郭安平; 沈文涛; 黎小瑛; 梁国栋; 《药物生物技术 》 2003 CSCD

摘要：利用毕赤氏酵母SMD1168构建huIFNα 2b分泌型高效表达工程菌株 ,以提高huIFNα 2b表达量和生物比活性 ,增强临床治疗效果和降低临床应用的毒性副作用。将克隆修饰的huIFNα 2b基因插入pGAPZα A之GAP启动子下游位点 ,构建成含α factor信号肽的重组表达载体 ,转入毕赤氏酵母 (Pichiapastoris)SMD1168,构建成分泌型表达huIFNα 2b的酵母工程菌株。SDS PAGE分析表明 ,该工程菌株huIFNα 2b表达量占菌体分泌总量的 50 %以上 ,表达量为 10 0～ 12 0 μg ml;MTT法测定纯化样品的生物比活性为 6 69× 10 8IU mg蛋白～ 1 11× 10 9IU mg蛋白 ,并通过柱层析分离纯化了huIFNα 2b ,纯度达 99 7% ,回收率达 15%～ 2 0 % ;Westernblotting分析表明表达的huIFNα 2b具有与天然huIFNα 2b相同的免疫原性

关键词： 毕赤氏酵母SMD1168 α-2b干扰素 分泌型表达

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椰园/牧草间作:主间作物之间相互的影响

唐龙祥; 林位夫; 牛启祥; 覃伟权; 刘立云; 《热带作物学报 》 2003 CSCD

摘要：进行了椰园间作牧草生态系统的研究。通过不同类型椰园间作不同品种牧草的适应性试验,观测了不同主间作物栽培方式中椰园根系分布、土壤养分与温度、主间作物生长及产量等方面的变化。结果表明:(1)在种植密度为10m×6m的椰园(相对光照强度约在50%以上)中,禾本科和豆科牧草均能正常生长;在8m×6m的椰园(相对光照强度约在30%左右)中,多数牧草品种能正常生长;在6m×6m的椰园(相对光照强度不足30%)中,只有少数禾本科牧草能基本正常生长。(2)禾本科牧草与椰树组成的系统稳定性比豆科牧草的好。(3)间作物一般应距幼树1m、成龄树2m以外的地方种植。(4)合理压青培肥与科学防治金龟子害虫,有利于加强主间作物生态系统的稳定性。

关键词： 椰子 牧草 间作 相互影响

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黏膜免疫与转基因植物口服疫苗的研究

沈文涛; 周鹏; 《中华预防医学杂志 》 2003 北大核心 CSCD

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阿米西达对芒果炭疽病的防治

邓泽明; 胡美姣; 杨凤珍; 张令宏; 刘秀娟; 《热带作物学报 》 2003 CSCD

摘要：进行了室内药剂对芒果炭疽病菌的毒力测定及2 a大田喷药防治芒果炭疽病的试验。结果表明,阿米西达具有很好的抑制产孢和孢子萌发的能力,在芒果刚抽嫩稍或花穗抽出3 cm时,每隔7-10 d喷150-200μg·mL-1阿米西达SC可有效地控制芒果叶片炭疽病的为害程度,防效达44.84％-87.06％;同时还可减少炭疽病的潜伏侵染菌量,并减轻果实贮藏期间的病情。

关键词： 芒果 炭疽病 阿米西达

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中国柱花草炭疽病原菌遗传多态性的RAPD分析

易克贤; 黄俊生; 刘国道; Pualine Weeds; Sukumar Charkraborty; 《微生物学报 》 2003 北大核心 CSCD

摘要：在对中国柱花草炭疽病进行广泛调查和病原采样收集的基础上 ,利用RAPD分子标记技术对 43个代表性菌株进行了基因组DNA分析 ,并与 2 76份国外菌株进行了综合聚类分析。结果表明所用 8个引物的扩增片段位于 0 3～ 2 8kb之间 ,菌株间呈现显著的DNA多态性。以柱花草起源中心———南美的柱花草炭疽菌分类为基础 ,中国柱花草炭疽菌可划分成 3大类型即Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ类。中国菌株与来自柱花草起源中心———南美的菌株相比之下 ,其生物多样性和遗传变异性则相对简单。就中国菌株而言海南菌株与广西、广东菌株相比多样性较丰富 ,中国柱花草胶孢炭疽菌正在出现种内遗传分化。从聚类结果看 ,通常来自于同一个地理区域或同一个寄主基因型的菌株聚成一类 ,即同一RAPD聚类组内的菌株通常来自于同一寄主基因型或同一地理区域。说明来自不同寄主基因型或物种的炭疽菌在遗传基因上具有专化性 ,而地理上隔离的国家或地区的柱花草炭疽病原菌各自具有相对独立的进化途径。

关键词： 柱花草 胶孢炭疽菌 随机扩增多态性DNA分析

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转基因番木瓜作为抗结核植物口服疫苗的初步研究

张更林; 周鹏; 郭安平; 沈文涛; 黎小瑛; 《云南植物研究 》 2003 北大核心 CSCD

摘要：转基因植物疫苗的研制 ,可改变传统的疫苗接种方式和接种手段 ,大大降低疫苗的生产成本 ,具有广阔的应用前景。结核病的泛滥使抗结核的免疫预防急需开发新型的疫苗 ,研制抗结核的转基因植物疫苗具有重大的理论和实践意义。本文对具有良好免疫原性的结核杆菌分泌蛋白ESAT 6基因 ,进行了修饰改造 ,构建了带潮霉素选择抗性基因的植物表达载体和根癌农杆菌工程菌 ;采用叶盘法转化热带水果番木瓜 ,获得了 13株抗性植株 ,通过PCR、Southernblot和RNAdotblot分子检测 ,确认了 4株为转基因植株。番木瓜ESAT 6转基因植株的获得 ,为进一步的结核病植物口服疫苗的免疫研究和新型抗结核疫苗的研制与开发奠定了基础。

关键词： 转基因番木瓜 ESAT-6分泌蛋白 口服疫苗

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巴西橡胶树乳管肌动蛋白细胞骨架与采胶的关系

高政权; 孟春晓; 吴继林; 郝秉中; 《热带作物学报 》 2003 CSCD

摘要：以成龄巴西橡胶树为材料,用免疫印迹技术研究了胶乳中的肌动蛋白,并用异硫氰酸四甲基罗丹明标记的鬼笔环肽荧光探针检查了乳管伤口的肌动蛋白细胞骨架。割胶后收集的胶乳,经超速离心分离的各个组分中,C乳清(胞质溶液)组分含有肌动蛋白。排胶初始期流出的胶乳中肌动蛋白含量多,排胶后期流出的胶乳中肌动蛋白的含量减少。比较了不同割胶强度下收集的胶乳中肌动蛋白的含量,结果表明在强度割胶条件下,胶乳中的肌动蛋白含量较少。用显示肌动蛋白微丝的鬼笔环肽荧光探针检测到,停止排胶时的乳管伤口末端有一团呈现橙红色的荧光物质,表明了肌动蛋白微丝在伤口末端聚积。进行了外施肌动蛋白微丝的解聚剂大环内脂和碘化钾刺激采胶试验,结果表明:施用质量分数1％的碘化钾和饱和浓度的大环内酯水溶液能使胶乳产量增加。这些事实表明,肌动蛋白细胞骨架可能在橡胶树乳管排胶和乳管堵塞中起重要作用。

关键词： 巴西橡胶树 乳管 肌动蛋白细胞骨架

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