干酪乳杆菌胸苷酸合成酶基因的分子克隆与序列测定

文献类型: 中文期刊

第一作者: 王春凤

作者: 王春凤;王春凤;秦泽荣;孙哲;崔尚金;崔尚金;何昭阳;刘尚高

作者机构:

关键词: 胸苷酸合成酶基因;分子克隆;序列测定

期刊名称: 中国预防兽医学报

ISSN: 1008-0589

年卷期: 2000 年 S1 期

页码:

收录情况: 北大核心

摘要: 本研究的目的是以干酪乳杆菌 L. casei 34103染色体 DNA为模板,利用 PCR技术扩增出胸苷酸合成酶(Thymidylatesynthase, thyA)基因,利用玻璃奶回收纯化试剂盒回收纯化thyA基因,并将其克隆入以红霉素抗性为选择压力的可以在大肠杆菌和乳酸菌中穿梭表达的质粒pW425e,再转化X51感受态细胞,筛选阳性克隆,提取质粒,进行酶切鉴定、PCR扩增鉴定,并对thyA基因片段进行测序,与已知序列进行同源性比较,结果表明成功克隆了 thyA基因,全长约 1.1kb,与国外报道的 thyA基因同源性达99%。这为构建以thyA基因为选择压力的非抗生素抗性穿梭表达载体奠定了基础。

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