基于FLUOstar平台的小麦dsDNA荧光定量与基因型分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 肖永贵

作者： 肖永贵;Susanne DREISIGACKER;Claudia NU?EZ-RíOS;胡卫国;夏先春;何中虎

作者机构：

关键词： 普通小麦;dsDNA;荧光定量;显性标记;分子育种

期刊名称： 作物学报

ISSN： 0496-3490

年卷期： 2017 年 07 期

页码： 947-953

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 双链DNA(dsDNA)定量分析是植物分子生物学研究的基础,对基因型分析尤为重要。本研究以λ噬菌体dsDNA为标准样品,建立了荧光定量标准曲线,探讨荧光核酸定量通量性及其与紫外法定量的差异,并分析荧光染料在基因分型中的应用。结果表明,荧光染料能够对dsDNA进行高效微量定量分析(<1.1ngmL-1),但因鉴定核酸的浓度较低,对小麦籽粒和叶片全基因组DNA定量时稀释倍数较大,易增大浓度误差。降低反应体系量导致标准曲线决定系数降低,影响测量准确性。精确定量dsDNA浓度时,总反应体系应大于200mL;对PCR产物进行基因分型时,总反应体系应不低于40mL。相同DNA模板浓度下,FLUOstar平台可以对抗秆锈病基因显性标记csSr32#1(Sr32)和IB-267(Sr50)的PCR产物进行基因型分型,判断准确率为100%。对特异性强且等位基因片段差异大(≥100bp)的共显性标记,如抗叶锈病基因标记We173(Yr26)等,用荧光染料同样可以进行基因分型。与琼脂糖凝胶电泳相比,荧光染料鉴定等位基因价格略高,但方法简单、准确快速、重现性好,可用于分子育种中世代材料快速筛选。

分类号： S512.1

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