猪细小病毒LAMP-LFD检测方法的建立及初步应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 柴书军

作者： 柴书军;郭军庆;乔松林;崔燕

作者机构：

关键词： 猪;猪细小病毒;环介导等温扩增技术;探针;检测试纸

期刊名称： 黑龙江畜牧兽医(上半月)

ISSN： 1004-7034

年卷期： 2022 年 004 期

页码： 13-18,24,126

收录情况： 北大核心

摘要： 为了建立一种用于猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)的特异、灵敏、快速检测方法,试验根据GenBank发布的PPV基因序列保守区片段设计了 一套带生物素标签的特异性引物和FITC探针,以pET28a-NS1重组质粒为阳性模板将环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术与侧向流动层析试纸(lateral flow dipstick,LFD)相结合,建立了 PPV-LAMP-LFD检测方法,对LAMP-LFD的反应温度、反应时间及胶体金标记FITC-mAb比例进行优化,分析该方法的敏感性和特异性,并检测其早期临床应用效果.结果表明:建立的PPV-LAMP-LFD检测方法最适反应温度为64℃,最佳反应时间为50 min;标记1 mL胶体金需要14 μg FITC-mAb;该检测方法的最低检测限为1x10 copies/μL,比琼脂糖凝胶电泳和荧光定量PCR灵敏度高19倍;对猪伪狂犬病毒(PRV)、蓝耳病病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪乙型脑炎病毒(JEV)和猪瘟病毒(CSFV)检测结果均呈阴性;早期临床应用显示可在猪感染PPV后4 h的血液中检出病毒.说明建立的PPV-LAMP-LFD 检测方法具有灵敏、特异、快速、简便等优点.

分类号： S852.65+9.2

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