旋毛虫TsP53抗原基因的原核表达及抗原性分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王鸿盛

作者： 王鸿盛;李文卉;盖文燕;姚菊霞;曲自刚

作者机构：

关键词： 旋毛虫;TsP53;原核表达;抗原性

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2010 年 04 期

页码： 373-377

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 应用RT-PCR方法从旋毛虫肌幼虫总RNA中获得TsP53基因片段,限制性酶切后连接到表达质粒pET30a中,转化大肠杆菌DH5α。筛选阳性克隆,经限制性酶切、PCR分析及测序鉴定后,将重组表达质粒pET30a-TsP53转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导表达。SDS-PAGE分析表达产物,对表达产物纯化后通过间接ELISA鉴定重组蛋白的抗原性。结果显示,成功构建了重组表达质粒pET30a-TsP53,测序结果表明插入片段为1 176 bp,编码391个氨基酸残基,与旋毛虫P53抗原基因序列(U25127)有99%的同源性,开放阅读框正确。含有pET30a-TsP53重组表达质粒的大肠杆菌BL21(DE3)诱导后得到了高效表达,SDS-PAGE显示表达产物分子质量约为50 ku,主要以包涵体形式存在。间接ELISA结果表明,重组抗原可以被旋毛虫感染不同时期的猪血清特异性识别,有望用于旋毛虫病的免疫诊断。

分类号： S852.7

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