烟草TILLING技术体系的建立及NtPhyB基因的筛选

文献类型： 中文期刊

第一作者： 宗鹏

作者： 宗鹏;李凤霞;王倩;刘贯山;龚达平;陈雅琼;孙玉合

作者机构：

关键词： 功能基因组学;TILLING;烟草;化学诱变;突变体

期刊名称： 中国烟草科学

ISSN： 1007-5119

年卷期： 2014 年 02 期

页码： 32-36

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 定向诱导基因组局部突变技术(Targeting Induced Local Lesions In Genomes,TILLING)是一种新近发展起来的高通量检测点突变的反向遗传学方法。本研究首次将TILLING技术用于EMS处理的烟草突变体筛选中,通过对正反向荧光引物使用量的摸索,确定了10μL PCR体系中IRDye-700标记的正向引物(1μM)适用量为0.32~0.64μL,IRDye-800标记的反向引物(1μM)适用量1.12~1.6μL;对异源双链CELⅠ酶切体系实验表明,10μL PCR产物中加入0.6μL CEL I酶,1.5μL 10×Buffer酶切效果最好。从而建立并优化了适用于普通烟草基因组研究的TILLING技术体系。在此基础上,以NtPhyB为目标基因,在1000份0.6%EMS诱变的M2突变体中进行筛选,共得到13个突变体,该基因突变频率约为1/94 kb。本试验建立的TILLING筛选体系能够快速、高效地筛选任意已知序列基因的突变体,对烟草功能基因组研究具有重要意义。

分类号： S572

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