H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体IPMA检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 石建州

作者： 石建州;李青梅;王彦红;刘肖;李鸽;郭军庆;邓瑞广;张改平

作者机构：

关键词： H1N1亚型猪流感病毒;免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA);单克隆抗体

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2019 年 009 期

页码： 2691-2698

收录情况： 北大核心

摘要： 本试验旨在建立一种针对检测抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验(immunoperoxidase monolayer assay,IPMA)筛选方法.通过优化MDCK细胞接毒量、细胞接毒后培养时间、封闭液的种类和工作浓度、工作时间等各个反应条件,并对建立的IPMA筛选方法的特异性、敏感性和重复性进行评价.结果显示,建立的IPMA检测方法的最优反应条件为MDCK细胞接毒102.63 TCID50/100μL H1N1亚型猪流感病毒,37℃培养24 h,含3‰H2O2的甲醇室温固定15 min,5%脱脂乳37℃封闭2 h,50μL杂交瘤细胞上清作为一抗,37℃孵育2 h,羊抗鼠HRP-IgG二抗37℃孵育1 h.所建立的IPMA方法能特异性地检测H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体,与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪瘟病毒(CSFV)阳性血清不发生交叉反应;其敏感性检测结果显示,可检测1∶3 200的HI=2-9标准H1N1猪阳性血清;批间和批内重复性试验结果较好.综上所述,本试验成功建立了抗H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体的IPMA检测方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性好,为生产鉴定H1N1亚型猪流感病毒单克隆抗体提供了一种简便、实用、有效的检测手段.

分类号： S852.65

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