含铁蛋白FAO1融合基因的衣藻核转化表达和分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李明泽

作者： 李明泽;程奇

作者机构：

关键词： 长链脂肪醇氧化酶;信号肽;His-tag标签;衣藻核转化;RT-PCR

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2013 年 46 卷 21 期

页码： 4515-4522

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】fao1编码Candida cloacae中一种含铁辅基的长链脂肪醇氧化酶。通过构建该基因的衣藻核转化表达载体进行转化,根据表达蛋白的生物活性判断fao1能否充分利用衣藻叶绿体中的铁元素行使功能;同时也为需铁固氮酶基因的研究提供方向。【方法】通过PCR把PsaD信号肽、fao1、His-tag标签融合,连接到pDBle载体上;采用玻璃珠转化法,将重组子导入莱茵衣藻(CW15)中;经博来霉素筛选后,获得转基因植株。运用PCR和RT-PCR法检测了转化衣藻,并且用亲和层析柱纯化蛋白,同时进行FAO1活性检测。【结果】重组质粒测序完全正确;PCR和RT-PCR检测转化衣藻基因组DNA和RNA,扩增片段与预期相符;转化衣藻FAO1蛋白纯化洗脱液使ABTS(2,2′-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺盐)底物反应变色。【结论】成功构建了信号肽、FAO1和His-tag融合基因的衣藻核转化表达载体,重组质粒已整合到莱茵衣藻基因组中,并成功转录,纯化的蛋白检测有活性。

分类号： Q943.2`S184

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