一种高效、稳定的可溶性原核表达载体的构建及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 高闪电

作者： 高闪电;常惠芸;独军政;丛国正;邵军军;林彤

作者机构：

关键词： 口蹄疫病毒;原核表达;可溶性;信号肽

期刊名称： 华北农学报

ISSN： 1000-7091

年卷期： 2009 年 24 卷 06 期

页码： 46-49

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因重组克隆载体pGEM-OVP1为模板,设计表达引物,经PCR扩增获得上游带有PelB信号肽编码序列的VP1 C端编码区,将其克隆至该表达载体pET-30a(+)中,构建了可溶性原核表达载体pET-30a-PelB-VP1C。将VP1全长编码区替换VP1C,获得重组原核表达载体pET-30a-PelB-VP1。将两种重组质粒分别转化大肠杆菌工程菌株BL21-(DE3)-plysS,经IPTG诱导表达,实现了VP1全长及其C端的可溶性表达,以金属离子螯合层析法分别对表达的VP1及其C端融合蛋白进行纯化,SDS-PAGE显示纯化的目的蛋白分别在32 ku和20 ku处有单一目的条带,具有较高的纯度。Western blot分析,VP1蛋白及其C端均可与牛O型口蹄疫病毒阳性血清反应。对重组菌株的连续传代实验证实了该可溶性表达载体的遗传稳定性,显示了该可溶性原核表达载体在蛋白可溶性表达中的应用价值。

分类号： Q78

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