鼠抗人S100A9天然蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 米丹阳

作者： 米丹阳;段睿;宋军营;孙向东;张钟允

作者机构：

关键词： 白细胞;S100A9;单克隆抗体;免疫学特性

期刊名称： 中国免疫学杂志

ISSN： 1000-484X

年卷期： 2016 年 32 卷 10 期

页码： 1485-1490

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的:探索以白细胞为免疫原的鼠抗人白细胞天然蛋白单克隆抗体(monoclonal antibodies,m Abs)制备与克隆筛选鉴定方法,制备鼠抗人S100A9天然蛋白单克隆抗体,并鉴定抗体性质。方法:用健康人外周血白细胞免疫小鼠,利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备m Abs,通过免疫细胞化学法对杂交瘤细胞进行非特异性阳性筛选,有限稀释法进行亚克隆,应用免疫沉淀-质谱法进行mAb特异性鉴定,通过Western blot进行细胞株筛选,小鼠体内诱生腹水法制备单抗,亲和层析法纯化,ELISA间接法测定效价及亲和力,Western blot进行特异性鉴定及交叉反应性分析,免疫组化染色人乳腺癌石蜡切片。结果:获得免疫细胞化学检测阳性多克隆细胞35孔,分泌鼠抗人S100A9蛋白单克隆抗体细胞株11株,优选1株制备腹水并纯化鉴定抗体,抗体效价为1∶3.18×10~5,亚类为IgG1,轻链为kappa链,抗体纯度达95%以上,亲和力常数3.54×10~8L/mol,与S100A8的交叉反应率为0.12%,与S100A12和S100A13几乎无交叉反应,组化染色识别人乳腺癌组织中的S100A9蛋白。结论:成功制备鼠抗人S100A9天然蛋白单克隆抗体,该单抗具有高效价、较高亲和力和高特异性,能为其应用于免疫组化检测S100A9蛋白的表达提供依据。

分类号： R392

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