实时荧光定量PCR检测布鲁杆菌方法的应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张宏霞

作者： 张宏霞;祈文学;刘文兴;胡森;于占水;杜美兰;薛维国;步志高

作者机构：

关键词： 布鲁杆菌;聚合酶链反应;检测

期刊名称： 中国地方病学杂志

ISSN： 1000-4955

年卷期： 2009 年 005 期

页码： 476-479

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的 探讨实时荧光定量PCR(FQ-PCR)用于布鲁杆菌检测的可行性.方法 根据布鲁杆菌BCSP31基因设计合成1对引物和TAQMAN探针,以克隆有布鲁杆菌基因片段的PMD18-T质粒作为标准品DNA模板,进行FQ-PCR检测,绘制标准曲线;对所应用的方法分别进行敏感性、特异性及重复性分析;并对临床血液标本进行FQ-PCR,与临床诊断进行比较.结果 用标准品DNA建立的定量标准曲线的循环阈值(CT)与模板拷贝数呈良好的线性关系(R=0.999);FQ-PCR检测的灵敏度拷贝数为5个/μL,普通PCR为5*102个/μL,FQ-PCR是普通PCR的100倍;用FQ-PCR检测6株布鲁杆菌菌株及5株非布鲁杆菌菌株,布鲁杆菌均检出较强荧光信号,非布鲁杆菌未检出;5*103个拷贝/μL标准品DNA检测后,CT值批内变异系数(CV)为0.71%,批间CV为7.23%;用FQ-PCR检测临床确诊阳性血标本24份,检出阳性19份,符合率为79%(19/24),阴性对照血标本31份,全部阴性,阴性符合率为100%(31/31),临床症状可疑标本30份,检出阳性2份.结论 用FQ-PCR方法检测布鲁杆菌具有高度敏感性、特异性及良好的重复性,与临床阳性及阴性标本的符合率较高,可用于快速检测各种样本中的微量布鲁杆菌以及作为布鲁杆菌感染的实验室检测方法.

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