文献类型： 中文期刊

作者： 谢社风 ¹ ; 韩贝贝 ¹ ; 高凤磊 ² ; 马莹 ¹ ; 李莉 ¹ ; 张守全 ¹ ; 邹娴 ³ ; 卫恒习 ⁴ ;

作者机构： 1.国家生猪种业工程技术研究中心/广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室/华南农业大学动物科学学院

2.广东农工商职业技术学院热带农林学院

3.广东省农业科学院动物科学研究所

4.国家生猪种业工程技术研究中心/广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室/华南农业大学动物科学学院    

关键词： 猪;催乳素;CHO-K1细胞;真核表达;慢病毒载体;重组蛋白

期刊名称： 华南农业大学学报

ISSN：

年卷期： 2024 年 002 期

页码： 179-189

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】催乳素（Prolactin,PRL）具有广泛的生理调节作用，但其多效性机制仍不清楚。为了更好地研究猪PRL的多效性，本研究制备猪源PRL真核重组蛋白并验证其生物活性。【方法】利用分子克隆技术将猪PRL基因克隆到慢病毒表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-GFP+Puro中，经慢病毒包装获得携带猪PRL基因的PRL-慢病毒；用浓缩的PRL-慢病毒感染CHO-K1细胞，经嘌呤霉素筛选后，获得能够分泌PRL重组蛋白的阳性细胞系CHO-K1-PRL；利用镍柱亲和层析法对重组蛋白进行纯化并进行LC-MS/MS质谱鉴定，利用HC11细胞体外培养体系验证PRL重组蛋白的生物活性。【结果】成功构建了携带猪PRL基因的pCDH-CMV-6His-PRL-6HisEF1-GFP+Puro慢病毒表达载体；包装及浓缩后的PRL-慢病毒滴度为9.9×108 TU/mL，其感染的CHO-K1细胞经嘌呤霉素筛选后得到阳性细胞系CHO-K1-PRL；从CHO-K1-PRL细胞培养液中成功纯化出重组蛋白，质量浓度为50μg/mL,LC-MS/MS质谱分析的覆盖率达94%，鉴定为猪PRL重组蛋白；重组PRL具有促进HC11细胞增殖及酪蛋白表达的生物活性。【结论】构建的细胞系CHO-K1-PRL可稳定表达具有生物活性的猪重组PRL，为猪PRL功能的研究和生产应用奠定了基础。