文献类型： 中文期刊

作者： 王海英 ¹ ; 陈志芳 ¹ ; 朱甜甜 ¹ ; 孙晶晶 ¹ ; 王伟 ¹ ; 郝建华 ¹ ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院黄海水产研究所

关键词： 褐藻胶裂解酶;褐藻寡糖;酶学性质;异源表达

期刊名称： 食品与发酵工业

ISSN： 0253-990X

年卷期： 2025 年 51 卷 015 期

页码： 174-184

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 褐藻胶通过生物降解法可制备低分子质量的褐藻寡糖，以克服褐藻胶生物利用度低的缺点，广泛应用于医疗、食品、化妆品等行业。该研究克隆表达了一株海洋弧菌Vibrio sp.L2中的褐藻胶裂解酶基因AlgL3199,并对其酶学性质和降解产物进行研究。以Vibrio sp.L2基因组为模板，克隆褐藻胶裂解酶基因，构建重组质粒pET-24a（+）/AlgL3199进行异源表达，经HisTrap^TM HP柱亲和层析纯化后进行酶学性质及降解产物的研究。结果表明，重组酶AlgL3199最适温度为40℃,在10～35℃下保温1 h可保留80%以上的活性；最适pH值为10,在pH 8～10孵育12 h可保留70%以上的活性；金属离子终浓度为1 mmol/L时，Cu²⁺、Mn²⁺、Co²⁺对重组酶AlgL3199有明显促进作用，十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate, SDS）及EDTA完全抑制酶的活性；NaCl终浓度为1.125 mol/L时对重组酶AlgL3199激活效应最强；根据底物特异性及薄层层析结果表明，重组酶AlgL3199酶解PolyM、PolyG及褐藻酸钠的主产物均为二糖至四糖，是一种具有G偏好性的内切型双功能酶。以上结果表明，AlgL3199已成功在大肠杆菌中实现了异源表达，在低温和弱碱性环境下比较稳定，是一种双功能褐藻胶裂解酶，这为褐藻胶的降解提供了一种新型工具酶，有利于褐藻工业生物技术的发展和应用。