文献类型： 中文期刊

作者： 金夕雨 ¹ ; 李守湖 ¹ ; 吴越 ¹ ; 储旭 ¹ ; 王伟 ¹ ; 房文红 ¹ ; 李新苍 ¹ ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院东海水产研究所农业农村部低洼盐碱地水产养殖重点实验室

关键词： 拟穴青蟹;MCRV;检测方法;TaqMan qRT-PCR;苗种

期刊名称： 渔业科学进展

ISSN： 2095-9869

年卷期： 2025 年 46 卷 004 期

页码： 230-237

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 拟穴青蟹(Scylla paramamosain)苗种携带青蟹呼肠孤病毒(mud crab reovirus, MCRV)对后期养殖具有极大的风险。培育无MCRV苗种，从源头切断该病毒传播，已成为当前青蟹养殖中亟待解决的关键问题。为提高青蟹苗种MCRV检测的灵敏度，本研究选择MCRV的高表达基因VP11作为靶标，设计特异性引物和Taq Man-MGB探针，以标准品质粒和RNA为模板，通过优化反应体系和反应程序，建立了一种适用于青蟹苗种MCRV检测的TaqMan-MGB实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法，能够实现对MCRV的精准检测。在1×10～8～1×10～1 copies/μL标准品质粒(或dsRNA)的范围内，起始模板浓度对数值与反应循环数间呈良好的线性关系，最低可精确定量10 copies标准品质粒或dsRNA/反应的样品，该方法最低理论检测极限为2.5 copies标准品质粒/反应。以青蟹双顺反子病毒(MCDV)、对虾白斑综合症病毒(WSSV)、十足目虹彩病毒(DIV1)、虾肝肠胞虫(EHP)及副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)核酸样品作为模板进行检测，均未产生特异性扩增。该检测方法对质粒和dsRNA样品的变异系数分别为1.40%和0.98%，具有良好的重复性和稳定性。使用该方法和SYBR Green qRT-PCR方法同时对14份不同发育阶段蚤状幼体进行检测，MCRV检出率分别为78.57%和57.14%。上述研究结果表明，该检测方法稳定性好、特异性强、灵敏性更高，适用于不同发育阶段青蟹幼体的MCRV检测，可为无MCRV青蟹苗种的生产提供关键技术支撑。