文献类型： 中文期刊

作者： 倪金荣 ¹ ; 叶莹莹 ¹ ; 马英 ¹ ; 蔡鸿娇 ¹ ; 谭红连 ² ; 童桂香 ² ; 韦信贤 ² ; 房文红 ³ ; 翁齐彪 ⁴ ; 林茂 ¹ ;

作者机构： 1.集美大学 水产学院

2.广西水产科学研究院

3.中国水产科学研究院东海水产研究所

4.福建省鳗鱼养殖与加工重点实验室

关键词： 溶藻弧菌;噬菌体;裂解酶;重组表达;溶菌

期刊名称： 微生物学报

ISSN： 0001-6209

年卷期： 2025 年 65 卷 010 期

页码： 4431-4443

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]挖掘并开发高活性、高稳定性且可异源重组表达的噬菌体源裂解酶,确定其最优作用条件.[方法]采用浊度法验证重组表达裂解酶的溶菌活性及其最适作用条件.[结果]对溶藻弧菌噬菌体phiV208 全基因组进行注释和蛋白预测,结果显示ORF30 编码的蛋白具备裂解酶功能,将其命名为 lysV208.lysV208 可在大肠杆菌 BL21(DE3)中可溶性高效表达,经0.25 mmol/L IPTG诱导 16 h后,纯化浓度达 204 μg/mL.与 0.5 mmol/L EDTA协同作用时,其溶菌活性(浊度降低率)可从 24.2%大幅提高至 68.0%.酶学特征研究表明,lysV208 的最适作用温度为 45℃(溶菌活性 75.6%),在水生动物乃至陆生动物常见的细菌性疾病流行温度范围(25-37℃)内,也具有较高溶菌活性(52.8%-71.9%).lysV208 的最适作用pH为 7.0,在弱碱性条件(pH 7.0-9.0)下可保持较高的溶菌活性(44.0%-63.2%),显示出对海淡水养殖环境的适应性.此外,二价金属离子(Zn2+、Mg2+、Mn2+、Fe2+)在 0.1-1.0 mmol/L浓度范围内对lysV208 的溶菌活性有一定促进作用,但高浓度(10.0 mmol/L)离子会极显著抑制酶活性(P<0.01).裂解谱检测表明,重组酶lysV208不仅能高效裂解源噬菌体的宿主菌V208,还对非宿主菌株表现出广谱溶菌能力,对溶藻弧菌V039、创伤弧菌H1、副溶血弧菌GH32、哈维氏弧菌TY13 和G1 菌株的溶菌活性分别达到了59.7%、68.9%、65.8%、38.0%和 65.6%.[结论]重组裂解酶lysV208 具有显著且稳定的体外溶菌活性,其裂解谱比源噬菌体phiV208 更广.该酶在病原菌感染的生物防控领域,以及噬菌体-裂解酶协同制剂的开发中具有良好的应用前景.