文献类型： 中文期刊
作者： 张彦冰 1 ; 叶加鑫 1 ; 孙威 1 ; 刘晓丹 1 ; 林强 1 ;
作者机构： 1.中国水产科学研究院珠江水产研究所,农业农村部渔用药物创制重点实验室,广东省水产动物免疫技术重点实验室;扬州大学动物科学与技术学院
关键词： 鳜弹状病毒;糖蛋白;杆状病毒表达系统;重组杆状病毒
期刊名称： 水产科学
ISSN： 1003-1111
年卷期： 2024 年 43 卷 002 期
页码： 281-288
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 近年来,鳜弹状病毒引起的病害频发,该病毒传播快,致病性强,是引起鳜病害的主要病原之一.鳜弹状病毒基因组编码 5 个结构蛋白,其中糖蛋白 G是病毒表面的主要抗原,为实现该抗原蛋白的大量表达,利用分子克隆技术将鳜弹状病毒糖蛋白 G片段插入杆状病毒穿梭载体 pFastBac1 中转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞后,筛选阳性克隆获得重组转移载体 pFastBac-G,再将其转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑与抗性筛选后获取重组杆粒 rBacmid-G,随后利用脂质体转染法将重组杆粒转染 Sf9 昆虫细胞制备重组杆状病毒.将获取到的P3 代重组病毒感染 Sf9 昆虫细胞进行重组蛋白的 SDS-PAGE检测,成功表达后利用镍离子亲和层析柱纯化目的蛋白,随后对重组蛋白进行Western blot鉴定,结果显示在大于 50ku处有一条特异性条带,而对照组无条带,表明制备的抗原能与抗体特异性结合.结果表明,鳜弹状病毒糖蛋白G在杆状病毒表达系统成功表达.本试验结果可为鳜弹状病毒糖蛋白 G疫苗的研发和大规模生产提供技术支撑.
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