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鹅生长激素基因的克隆、原核表达及其重组蛋白质的离子交换纯化

文献类型： 中文期刊

作者： 李辉 1 ; 陈蓉 1 ; 应诗家 1 ; 施振旦 1 ; 赵伟 1 ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院畜牧研究所

关键词： 鹅;生长激素;原核表达;阴离子交换

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2014 年 06 期

页码： 1387-1391

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了克隆鹅生长激素基因并表达其重组蛋白质,采集生长期鹅垂体组织,并利用TRIzol快速提取的总RNA为模板,反转录为c DNA。根据鹅生长激素基因编码的成熟肽序列(Gen Bank号:AY149895.2)设计1对引物,分别在上、下游引物的5'端引入Nhe I和Hind III酶切位点。经反转录扩增获得鹅生长激素基因的编码的成熟肽全序列。通过双酶切和连接将鹅生长激素编码区插入原核表达载体pRSET-A的Nhe I和Hind III位点之间,构建重组表达质粒pRSET-g GH并转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)。转化的菌株经IPTG诱导后表达重组鹅生长激素蛋白质,分子量约为2.93×104。经过DEAE-650M弱阴离子交换树脂纯化获得较高纯度的重组鹅生长激素蛋白质。

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