文献类型： 中文期刊

作者： 杨敏 ¹ ; 周陈平 ¹ ; 李庆萌 ¹ ; 邝瑞彬 ¹ ; 吴夏明 ¹ ; 魏岳荣 ¹ ;

作者机构： 1.广东省农业科学院果树研究所

关键词： 番木瓜;胚性悬浮系;根癌农杆菌;遗传转化;共培养

期刊名称： 果树学报

ISSN： 1009-9980

年卷期： 2023 年 010 期

页码： 2089-2097

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】建立番木瓜高效遗传转化体系，为番木瓜基因功能研究和重要农艺性状改良提供新的技术支撑。【方法】以紫晖番木瓜胚性细胞悬浮系（embryogenic cell suspensions,ECS）为遗传转化受体，利用植物表达载体pCAMBIA1301和农杆菌介导法进行遗传转化，对抗生素浓度筛选、侵染时间、继代培养、抗性胚的诱导与萌发以及植株再生整个过程进行探索，最后获得抗性再生植株。【结果】通过设置不同浓度的头孢霉素和潮霉素处理，观察ECS细胞状态，筛选、确定头孢霉素和潮霉素最适处理质量浓度分别为200 mg·L-1和5 mg·L-1。工程菌和ECS共培养侵染2 d后转到含有头孢霉素和潮霉素的液体筛选培养基上进行继代培养，继代周期为14 d。经GUS染色验证，表明继代3次后的ECS几乎全部为转化细胞。将以上ECS转移到液体胚诱导培养基中进行培养，2个月后可获得大量球形体细胞胚，且GUS组织染色为蓝色。将球形体细胞胚转到半固体成熟培养基上培养，2个月后可获得成熟子叶期体细胞胚。子叶期体细胞胚在萌发培养基上光培养30 d后，可获得再生芽。任意选取再生芽进行GUS染色，均可染成蓝色。抗性再生芽经促根培养可成功获得再生植株。利用PCR检测抗性再生植株，可以确定GUS基因已经整合到番木瓜基因组中。【结论】成功建立了一种以番木瓜ECS为转化受体的农杆菌介导的高效遗传转化体系。在该技术体系中，经农杆菌侵染后的ECS继代筛选3次后，几乎全部为转化细胞，这些转化细胞经体胚诱导、成熟、萌发和生根过程可成功获得再生植株，抗性体胚得胚率为43.65%，抗性体胚萌发率为73.26%，植株再生率为80.55%，大大提高了番木瓜遗传转化效率。该体系为番木瓜基因功能研究和分子育种提供了新的途径。