文献类型： 中文期刊

作者： 罗霞 ¹ ; 付小哲 ¹ ; 林强 ¹ ; 刘礼辉 ¹ ; 牛银杰 ¹ ; 梁红茹 ¹ ; 李宁求 ¹ ;

作者机构： 1.中国水产科学研究院珠江水产研究所

关键词： 鳜鱼病毒病;传染性脾肾坏死病毒(ISKNV);弹状病毒(SCRV);毒种库;种子批;二联灭活疫苗

期刊名称： 西北农林科技大学学报(自然科学版)

ISSN： 1671-9387

年卷期： 2022 年 50 卷 001 期

页码： 1-9

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]建立鳜鱼传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)和弹状病毒(SCRV)二联灭活疫苗毒种库及种子批.[方法]以ISKNV-QY0910株和SCRV-GM1503株为原始毒种,扩繁10代(F1~F10后检测各代病毒对鳜鱼脑组织细胞系(CPB)的致病性及其滴度,并检测其对鳜鱼的毒力.PCR扩增ISKNV的主衣壳蛋白(MCP)基因,RT-PCR法扩增SCRV G蛋白基因序列,检测ISKNV和SCRV毒种的特异性.对F1,F5和F10代ISKNV,SCRV毒种进行细菌,霉菌,支原体及鳜鱼蛙病毒(RANA)和神经坏死病毒(NNV)检测,检验毒种的纯粹性.分别将F1,F5和F10代ISKNV,SCRV病毒液用甲醛灭活后制备灭活疫苗,免疫鳜鱼21 d后攻毒,连续观察14 d,待鱼体稳定后统计死亡率并计算免疫保护率(RPS).将ISKNV和SCRV毒种湿毒保存于-80℃冰箱,每6个月取3支检测病毒滴度,以确定毒种的保存期.[结果]各代次毒株感染CPB细胞后产生的CPE形态及病变速度基本相同,SCRV滴度为108.58~108.875 TCID50/mL,ISKNV滴度为107.38~107.625 TCID50/mL.F1,F5和F10代ISKNV按104 TCID50/mL,SCRV按106.5 TCID50/mL对鳜鱼攻毒(每尾0.1 mL),致死率均超过90%.ISKNV和SCRV各代次毒种可分别扩增出1 300 bp的MCP基因和1 500 bp的G基因,特异性良好.ISKNV,SCRV毒种无细菌,霉菌,支原体及鳜鱼蛙病毒和神经坏死病毒污染.各代次病毒灭活疫苗对鳜鱼安全有效,免疫保护率ISKNV可达92%以上,SCRV可达84%以上;湿毒-80℃保存,保存期为36个月.[结论]10代以内ISKNV和SCRV的生物学特性稳定,可用于鳜鱼ISKNV和SCRV二联灭活疫苗的制备与检验.