文献类型： 中文期刊
作者： 杨穗珊 1 ; 易国辉 1 ; 屠发志 1 ; 张添元 2 ; 罗进贤 2 ; 张爱联 1 ;
作者机构： 1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物技术重点开放实验室
2.中山大学基因工程教育部蓖点实验室/生物化学系
关键词： 葡聚糖外切酶;P.pastoris;高密度发酵
期刊名称： 生物技术
ISSN： 1004-311X
年卷期： 2010 年 20 卷 06 期
页码： 64-66
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 目的:应用P.pastoris的pAOX1表达系统表达CBHⅡ酶。方法:PCR法扩增木霉的cbhⅡ基因。将其克隆进P.pastoris表达载体pPIC9k,电转法将其cbhⅡ基因重组于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性的克隆为工程菌。重组CBHⅡ酶的生产是在50 L生物反应器中进行。连续24h补加甘油-PTM4增殖细胞,然后用甲醇诱导表达64h。结果:放罐时生物量为A600=180,重组CBHⅡ产量为80mg/L。表达产物具有酶解羧甲基纤维素的活性。结论:实现应用pAOX1表达系统在生物反应器中高密度发酵P.pastoris诱导表达CBHⅡ。该研究为重组CBHⅡ的规模化生产打下基础。
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