文献类型： 中文期刊

作者： 邹娴 ¹ ; 张茂 ¹ ; 许惠 ¹ ; 林纯 ¹ ; 贺晓燕 ¹ ; 刘德武 ¹ ; 蔡更元 ² ; 吴珍芳 ¹ ;

作者机构： 1.华南农业大学动物科学学院

2.广东省农业科学院畜牧研究所

关键词： 黑曲霉;β-甘露聚糖酶;重叠延伸PCR;PK15细胞

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2011 年 0 卷 08 期

页码： 192-197

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 通过RT-PCR方法,从黑曲霉总RNA中克隆出β-甘露聚糖酶基因manA的成熟肽编码序列。将其与猪腮腺分泌蛋白(parotid secretory protein,PSP)基因的信号肽序列通过重叠延伸PCR方法得到拼接片段,并插入到真核表达载体pcD-NA6.0/HisTMA中,得到重组质粒pcDNA-PSmanA。重组质粒经过PCR、酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且读码框完全正确。在脂质体介导下将pcDNA-PSmanA转染猪肾(PK15)细胞进行分泌表达,通过RT-PCR方法证实其在PK15细胞中表达,并在细胞培养液中检测酶活性得到β-甘露聚糖酶基因酶活性为14.5 IU/mL。